Kit qPCR RT Langsung Sel—Siasatan Sel Lisis Sel Langsung Taqman Sedia Sel Satu langkah Kit qRT-PCR
Penerangan
Produk ini menggunakan sistem penimbal lisis yang unik untuk melepaskan RNA dengan cepat daripada sampel sel kultur untuk tindak balas RT-qPCR, menghapuskan proses penulenan RNA yang memakan masa dan susah payah, dan hanya 7 minit untuk mendapatkan templat RNA yang diperlukan, dengan 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman yang disediakan oleh kit boleh mendapatkan hasil kuantitatif PCR masa nyata dengan cepat dan cekap.
5× Direct RT Mix dan 2× Direct qPCR Mix-Taqman mempunyai toleransi perencat yang kuat dan boleh melakukan pembalikan yang cekap dan amplifikasi khusus menggunakan lysate sampel untuk diukur sebagai templat.Reagen mengandungi Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2, Penampan Reaksi, Pengoptimum PCR dan Penstabil, yang boleh digunakan dengan penimbal lisis untuk mengesan sampel dengan cepat dan mudah, serta mempunyai ciri-ciri kepekaan, kekhususan dan kestabilan yang tinggi.
Spesifikasi
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Komponen kit
| QuickEasyTMSel Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Komponen kit Sistem Reaksi qPCR 20μl | DRT-01021 | DRT-01022 | Catatan | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Bahagian I | Penampan CL | 4 ml | 20 ml | Lisis Sel |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Penampan ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Bahagian II | Pemadam DNA | 80 μl | 400 μl | |
| 5×Campur RT Terus * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 | qPCR | |
| Pewarna Rujukan 20×ROX | 40 μl | 200 μl | ||
| ddH Tanpa RNase2O | 1.7 ml | 10 ml | ||
| Arahan manual | 1 keping | 1 keping | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman boleh dibeli secara berasingan
Ciri&kelebihan
■Mudah dan berkesan : dengan teknologi Cell Direct RT, sampel RNA boleh diperolehi dalam masa 7 minit sahaja.
■ Permintaan sampel adalah kecil, serendah 10 sel boleh diuji.
■ Daya tampung yang tinggi: ia boleh mengesan RNA dengan cepat dalam sel yang dikultur dalam plat 384, 96, 24, 12, 6-telaga.
■ Pemadam DNA boleh membuang genom yang dikeluarkan dengan cepat, mengurangkan kesan ke atas keputusan eksperimen seterusnya.
■ Sistem RT dan qPCR yang dioptimumkan menjadikan transkripsi terbalik RT-PCR dua langkah lebih cekap dan PCR lebih spesifik, dan lebih tahan terhadap perencat tindak balas RT-qPCR.
Aplikasi kit
Skop penggunaan: sel kultur.
- RNA yang dikeluarkan oleh lisis sampel: hanya terpakai pada templat RT-qPCR kit ini.
- Kit boleh digunakan untuk tujuan berikut: analisis ekspresi gen, pengesahan kesan pembungkaman gen pengantara siRNA, pemeriksaan dadah, dsb.
Penyimpanan dan Jangka hayat
Bahagian I kit ini hendaklah disimpan pada 4℃;Bahagian II hendaklah disimpan pada -20℃.
Foregene Protease Plus II hendaklah disimpan pada 4℃, jangan beku pada -20 ℃.
Reagen 2×Direct qPCR Mix-Taqman hendaklah disimpan pada -20℃dalam gelap;jika digunakan dengan kerap, ia juga boleh disimpan di 4℃ untuk simpanan jangka pendek (habis dalam masa 10 hari).
Prinsip reka bentuk primer PCR Masa Nyata
Primer Hadapan dan Primer Songsang
Untuk PCR Masa Nyata, reka bentuk primer adalah sangat penting.Primer berkaitan dengan kekhususan dan kecekapan penguatan PCR, dan boleh direka bentuk dengan merujuk kepada prinsip berikut:
- Panjang primer: 18-30bp.
- Kandungan GC: 40-60%.
- Nilai Tm: Perisian reka bentuk primer, seperti Primer 5, boleh memberikan nilai Tm primer.Nilai Tm primer huluan dan hiliran hendaklah sedekat mungkin.Formula pengiraan Tm juga boleh digunakan: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Apabila melakukan PCR, suhu di bawah nilai Tm primer 5 °C biasanya dipilih sebagai suhu penyepuhlindapan (peningkatan yang sepadan dalam suhu penyepuhlindapan boleh meningkatkan kekhususan tindak balas PCR).
- Primer dan produk PCR:
- Panjang produk penguatan PCR primer reka bentuk adalah sebaik-baiknya 100-150bp.
- Primer reka bentuk di kawasan struktur sekunder templat harus dielakkan sebanyak mungkin.
- Elakkan pembentukan 2 atau lebih asas pelengkap antara hujung 3′ primer hulu dan hilir.
- Pangkalan terminal primer 3′ tidak boleh hadir dengan 3 G atau C tambahan berturut-turut.
- Primer itu sendiri tidak boleh mempunyai struktur pelengkap, jika tidak, struktur jepit rambut akan terbentuk, menjejaskan penguatan PCR.
- ATCG harus diagihkan sekata mungkin dalam urutan primer, dan pangkalan terminal 3′ harus dielakkan sebagai T.
Lampiran1：Cell LangsungRT-qPCR Komponen kitt pek tambahan
1.Penyelesaian Lisis Sel
| Penyelesaian Lisis Sel | |||
| Komponen kit (sistem lisis 24 telaga / telaga) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Bahagiansaya | Penampan CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Penampan ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| BahagianII | Pemadam DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| Campuran RT | |
| Komponen kit (sistem tindak balas 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Campuran RT Terus | 800 μl |
| ddH Tanpa RNase2O | 1.7 ml × 2 |
| Campuran qPCR | ||
| Komponen kit (sistem tindak balas 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| Pewarna Rujukan 20× ROX | 40 μl | 200 μl |
| ddH Tanpa RNase2O | 1.7 ml | 10 ml |
Manual Arahan:
