Jumlah Kit Pengasingan RNA Sel Jumlah Kit Pembersihan Pengasingan RNA daripada sel
Penerangan Kit:
Jumlah RNA yang sangat disucikan dan berkualiti tinggi boleh diperoleh daripada pelbagai sel kultur dalam masa 11 minit.
Bebas RNase
Dikendalikan pada suhu bilik (15-25 ℃)
Dengan Lajur Pembersihan DNA
Hasil RNA yang tinggi
Cepat:Selesaikan pengekstrakan dalam 11 minit
Keselamatan:Tiada bahan kimia organik
Penerangan
Kit ini menggunakan lajur putaran dan formula yang dibangunkan oleh Foregene, yang boleh mengekstrak jumlah RNA ketulenan tinggi dan berkualiti tinggi dengan cekap daripada sel yang dikultur dalam plat 96, 24, 12 dan 6 telaga.
Kit ini menyediakan Lajur Pembersihan DNA yang cekap, yang boleh memisahkan supernatan dan lisat sel, mengikat dan mengeluarkan DNA genomik dengan mudah.Operasinya mudah dan menjimatkan masa.
TLajur RNA sahaja boleh mengikat RNA dengan formula unik dengan cekap.Sebilangan besar sampel boleh diproses secara serentak.
Komponen kit
| Komposisi kit | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Penampan cRL1* | 25 mL | 100 mL |
| Penampan cRL2 | 15 mL | 60 mL |
| Penampan RW1* | 25 mL | 100 mL |
| Penampan RW2 | 24 mL | 96 mL |
| ddH2O Tanpa RNase | 10 mL | 40 mL |
| Lajur RNA-Sahaja | 50 | 200 |
| Lajur Pembersihan DNA | 50 | 200 |
| Arahan | 1 | 1 |
*Sila pakai sarung tangan dan ambil langkah perlindungan semasa operasi kerana Buffer cRL1 dan Buffer RW1 mengandungi garam chaotropic yang merengsa.
Ciri&kelebihan
■ Keseluruhan proses dikendalikan pada suhu bilik (15-25℃), tanpa mandi ais dan sentrifugasi suhu rendah.
■ Keseluruhan kit adalah Bebas RNase, tidak perlu risau tentang kemerosotan RNA.
■ Lajur Pembersihan DNA secara khusus mengikat DNA, supaya kit boleh membuang pencemaran DNA genomik tanpa menambah DNase tambahan.
■ Hasil RNA yang tinggi: Lajur RNA sahaja dan formula unik boleh membersihkan RNA dengan cekap.
■ Kelajuan pantas: mudah dikendalikan dan boleh disiapkan dalam masa 11 minit.
■ Keselamatan: Tiada reagen organik diperlukan.
■ Kualiti tinggi: RNA yang telah dimurnikan mempunyai ketulenan tinggi, bebas daripada protein dan kekotoran lain, dan boleh memenuhi pelbagai eksperimen seterusnya.
Aplikasi kit
Ia sesuai untuk pengekstrakan dan penulenan jumlah RNA daripada sel kultur dalam plat 96, 24, 12, dan 6 telaga.
Aliran kerja
Gambar rajah
Gambar rajah bateri gel agarose Kit Pengasingan RNA Jumlah Sel merawat bilangan sel yang berbeza di atas, elusi isipadu 20μl, mengambil 2μl jumlah RNA yang disucikan 1%.
Penyimpanan dan jangka hayat
Kit boleh disimpan selama 12 bulan pada suhu bilik (15–25 ℃) atau 2–8 ℃ untuk masa yang lebih lama (24 bulan).
Penampan cRL1 boleh disimpan pada 4 ℃ selama 1 bulan selepas menambah 2-hydroxy-1-ethanethiol(pilihan).
RNA tidak diekstrak atau hasil RNA rendah
Selalunya terdapat pelbagai faktor yang mempengaruhi kecekapan pemulihan, seperti: kandungan RNA sampel tisu, kaedah operasi, isipadu elusi, dsb.
1. Emparan mandi ais atau kriogenik (4 °C) dilakukan semasa operasi.
Syor: Beroperasi pada suhu bilik (15-25 ° C) sepanjang keseluruhan proses, jangan mandi ais dan sentrifuge pada suhu rendah.
2. Pemeliharaan sampel yang tidak betul atau masa penyimpanan sampel yang berlebihan.
Syor: Simpan sampel pada -80 °C atau beku dalam nitrogen cecair dan elakkan penggunaan beku-cair berulang;cuba gunakan tisu segar atau sel kultur untuk pengekstrakan RNA.
3. Lisis sampel tidak mencukupi.
Syor: Apabila menghomogenkan tisu, pastikan tisu dihomogenkan secukupnya dan sel-sel tisu dipecahkan secukupnya untuk menerangkan pembebasan RNA.
4. Eluen tidak ditambah dengan betul.
Syor: Sahkan bahawa RNase-Free ddH2O ditambah setitik demi setitik ke tengah membran lajur penulenan.
5. Isipadu etanol mutlak yang betul tidak ditambahkan pada Penampan RL2 atau Penampan RW2.
Syor: Ikut arahan, tambahkan isipadu etanol mutlak yang betul kepada Buffer RL2 dan Buffer RW2 dan gaul rata sebelum menggunakan kit.
6. Dos sampel tisu tidak sesuai.
Cadangan: Gunakan 10-20 mg tisu atau (1-5) × 106sel setiap 500 μl penampan RL1, kerana penggunaan tisu yang berlebihan boleh mengakibatkan pengekstrakan RNA berkurangan.
7. Isipadu elusi tidak betul atau elusi tidak lengkap.
Syor: Isipadu elusi lajur penulenan ialah 50-200 μl;jika kesan elusi tidak memuaskan, adalah disyorkan untuk melanjutkan masa peletakan suhu bilik selepas menambah ddH Bebas RNase yang dipanaskan terlebih dahulu2O, cth selama 5-10 min.
8. Lajur penulenan mempunyai sisa etanol selepas pencucian Penampan RW2.
Syor: Jika terdapat sisa etanol selepas mencuci Penampan RW2, sentrifugasi tiub kosong selama 1 minit, masa untuk operasi sentrifugasi tiub kosong boleh ditingkatkan kepada 2 minit, atau lajur penulenan boleh diletakkan pada suhu bilik selama 5 minit untuk mengeluarkan sisa etanol dengan secukupnya.
RNA yang disucikan terdegradasi
Kualiti RNA yang telah disucikan adalah berkaitan dengan faktor-faktor seperti pemeliharaan sampel, pencemaran RNase, dan manipulasi, dan lain-lain.
1. Sampel tisu tidak disimpan dalam masa.
Syor: Jika sampel tisu atau sel tidak digunakan tepat pada masanya selepas pengumpulan, segera simpan kriopsi pada -80 °C atau nitrogen cecair.Untuk mengekstrak RNA, gunakan tisu atau sampel sel yang baru diambil apabila boleh.
2. Pencairan beku berulang sampel tisu.
Syor: Apabila menyimpan sampel tisu, sebaiknya potong kecil-kecil untuk pemeliharaan, dan keluarkan salah satu kepingan apabila menggunakannya untuk mengelakkan pencairan beku berulang sampel dan degradasi RNA.
3. RNase diperkenalkan atau tidak memakai sarung tangan pakai buang, topeng, dsb. semasa operasi.
Syor: Eksperimen pengekstrakan RNA paling baik dilakukan dalam bilik manipulasi RNA yang berasingan dan jadual dibersihkan sebelum eksperimen.
Pakai sarung tangan dan topeng pakai buang semasa percubaan untuk meminimumkan kemerosotan RNA yang disebabkan oleh pengenalan RNase.
4. Reagen tercemar dengan RNase semasa digunakan.
Syor: Gantikan dengan Kit Pengasingan RNA Jumlah Haiwan baharu untuk eksperimen berkaitan.
5. Tiub emparan, petua, dsb. yang digunakan dalam manipulasi RNA tercemar dengan RNase.
Syor: Sahkan bahawa tiub emparan, petua, pipet, dsb. yang digunakan dalam pengekstrakan RNA semuanya Bebas RNase.
RNA yang diperolehi disucikan menjejaskan eksperimen hiliran
RNA disucikan oleh lajur penulenan, jika ion garam, kandungan protein yang terlalu besar akan menjejaskan eksperimen hiliran, seperti: transkripsi terbalik, Northern Blot et al.
1. RNA yang dielusi mempunyai sisa ion garam.
Syor: Sahkan bahawa isipadu etanol yang betul telah ditambahkan pada Penampan RW2 dan lakukan 2 pencucian lajur penulenan pada kelajuan emparan yang ditunjukkan untuk operasi;jika terdapat sebarang sisa ion garam, biarkan lajur penulenan ke Penampan RW2 selama 5 minit pada suhu bilik dan lakukan sentrifugasi untuk memaksimumkan penyingkiran pencemaran garam.
2. Sisa etanol dalam RNA yang dielusi.
Syor: Sahkan bahawa selepas penimbal RW2 mencuci, lakukan operasi sentrifugasi tiub kosong pada kelajuan sentrifugasi yang ditunjukkan untuk operasi, tambahkan masa operasi sentrifugasi tiub kosong kepada 2 minit jika masih terdapat sisa etanol, atau biarkan pada suhu bilik selama 5 m
