Tiada isyarat amplifikasi

1.Taq DNA Polymerase dalam kit kehilangan aktivitinya kerana penyimpanan yang tidak betul atau tamat tempoh kit.
Syor: Sahkan keadaan penyimpanan kit;tambah semula jumlah Taq DNA Polymerase yang sesuai pada sistem PCR atau beli Kit PCR Masa Nyata baharu untuk eksperimen berkaitan.

2. Terdapat banyak perencat Taq DNA Polymerase dalam templat DNA.
Cadangan: Bersihkan semula templat atau kurangkan jumlah templat yang digunakan.

3. Kepekatan Mg2+ tidak sesuai.
Syor: Kepekatan Mg2+ bagi 2× Campuran PCR Sebenar yang kami sediakan ialah 3.5mM.Walau bagaimanapun, untuk beberapa primer dan templat khas, kepekatan Mg2+ mungkin lebih tinggi.Oleh itu, anda boleh terus menambah MgCl2 untuk mengoptimumkan kepekatan Mg2+.Adalah disyorkan untuk meningkatkan Mg2+ 0.5mM setiap kali untuk pengoptimuman.

4. Keadaan penguatan PCR tidak sesuai, dan urutan primer atau kepekatan adalah tidak betul.
Cadangan: sahkan ketepatan jujukan buku asas dan buku asas itu tidak terdegradasi;jika isyarat amplifikasi tidak baik, cuba turunkan suhu penyepuhlindapan dan laraskan kepekatan primer dengan sewajarnya.

5.Jumlah templat terlalu sedikit atau terlalu banyak.
Syor: Lakukan pencairan kecerunan linearisasi templat dan pilih kepekatan templat dengan kesan PCR terbaik untuk percubaan PCR Masa Nyata.

NTC mempunyai nilai pendarfluor yang terlalu tinggi

1. Pencemaran reagen yang disebabkan semasa operasi.
Syor: Gantikan dengan reagen baharu untuk percubaan PCR Masa Nyata.

2. Pencemaran berlaku semasa penyediaan sistem tindak balas PCR.
Syor: Ambil langkah perlindungan yang diperlukan semasa operasi, seperti: memakai sarung tangan lateks, menggunakan hujung pipet dengan penapis, dsb.

3. Primer terdegradasi, dan degradasi primer akan menyebabkan penguatan tidak spesifik.
Cadangan: Gunakan elektroforesis SDS-PAGE untuk mengesan sama ada primer terdegradasi, dan menggantikannya dengan primer baharu untuk eksperimen PCR Masa Nyata.

Dimer primer atau penguatan bukan khusus

1. Kepekatan Mg2+ tidak sesuai.
Syor: Kepekatan Mg2+ bagi 2× Campuran Mudah PCR Sebenar yang kami sediakan ialah 3.5 mM.Walau bagaimanapun, untuk beberapa primer dan templat khas, kepekatan Mg2+ mungkin lebih tinggi.Oleh itu, anda boleh terus menambah MgCl2 untuk mengoptimumkan kepekatan Mg2+.Adalah disyorkan untuk meningkatkan Mg2+ 0.5mM setiap kali untuk pengoptimuman.

2. Suhu penyepuhlindapan PCR terlalu rendah.
Cadangan: Tingkatkan suhu penyepuhlindapan PCR sebanyak 1 ℃ atau 2 ℃ setiap kali.

3.Produk PCR terlalu panjang.
Syor: Panjang produk PCR Masa Nyata hendaklah antara 100-150bp, tidak lebih daripada 500bp.

4. Primer terdegradasi, dan degradasi primer akan membawa kepada penampilan amplifikasi tertentu.
Cadangan: Gunakan elektroforesis SDS-PAGE untuk mengesan sama ada primer terdegradasi, dan menggantikannya dengan primer baharu untuk eksperimen PCR Masa Nyata.

5. Sistem PCR tidak betul, atau sistem terlalu kecil.
Cadangan: Sistem tindak balas PCR yang terlalu kecil akan menyebabkan ketepatan pengesanan berkurangan.Adalah lebih baik untuk menggunakan sistem tindak balas yang disyorkan oleh instrumen PCR kuantitatif untuk menjalankan semula percubaan PCR Masa Nyata.

Kebolehulangan nilai kuantitatif yang lemah

1.Alat ini tidak berfungsi.
Cadangan: Mungkin terdapat ralat antara setiap lubang PCR instrumen, mengakibatkan kebolehulangan yang lemah semasa pengurusan atau pengesanan suhu.Sila semak mengikut arahan instrumen yang sepadan.

2. ketulenan sampel adalah tidak baik.
Pengesyoran: Sampel yang tidak tulen akan menyebabkan kebolehulangan percubaan yang lemah, yang termasuk ketulenan templat dan primer.Adalah lebih baik untuk menulen semula templat, dan primer paling baik disucikan oleh SDS-PAGE.

3. Masa penyediaan dan penyimpanan sistem PCR terlalu lama.
Cadangan: Gunakan sistem PCR Masa Nyata untuk percubaan PCR sejurus selepas penyediaan, dan jangan biarkan ia diketepikan terlalu lama.

4. Keadaan penguatan PCR tidak sesuai, dan urutan primer atau kepekatan adalah tidak betul.
Cadangan: sahkan ketepatan jujukan buku asas dan buku asas itu tidak terdegradasi;jika isyarat amplifikasi tidak baik, cuba turunkan suhu penyepuhlindapan dan laraskan kepekatan primer dengan sewajarnya.

5. Sistem PCR tidak betul, atau sistem terlalu kecil.
Cadangan: Sistem tindak balas PCR yang terlalu kecil akan menyebabkan ketepatan pengesanan berkurangan.Adalah lebih baik untuk menggunakan sistem tindak balas yang disyorkan oleh instrumen PCR kuantitatif untuk menjalankan semula percubaan PCR Masa Nyata.