• facebook
  • linkedin
  • Youtube

Antibodi, juga dipanggil immunoglobulin (Ig), adalah glikoprotein yang secara khusus mengikat antigen.
 
Penyediaan antibodi konvensional dihasilkan dengan mengimunkan haiwan dan mengumpul antiserum.Oleh itu, antiserum biasanya mengandungi antibodi terhadap antigen lain yang tidak berkaitan dan komponen protein lain dalam serum.Molekul antigen am kebanyakannya mengandungi berbilang epitop yang berbeza, jadi antibodi konvensional juga merupakan campuran antibodi terhadap berbilang epitop yang berbeza.Malah antibodi serum konvensional yang ditujukan kepada epitope yang sama masih terdiri daripada antibodi heterogen yang dihasilkan oleh klon sel B yang berbeza.Oleh itu, antibodi serum konvensional juga dipanggil antibodi poliklonal, atau singkatannya antibodi poliklonal.
 
Antibodi monoklonal (antibodi monoklonal) ialah antibodi yang sangat seragam yang dihasilkan oleh klon sel B tunggal dan hanya ditujukan kepada epitop tertentu.Ia biasanya disediakan oleh teknologi hibridoma—teknologi antibodi hibridoma berasaskan teknologi gabungan sel, menggabungkan sel B dengan keupayaan untuk merembeskan antibodi dan sel mieloma khusus dengan kapasiti pertumbuhan tidak terhingga ke dalam hibridoma sel B.Sel hibridoma ini mempunyai ciri-ciri sel induk.Ia boleh membiak selama-lamanya dan kekal secara in vitro seperti sel myeloma, dan ia boleh mensintesis dan merembeskan antibodi khusus seperti limfosit splenik.Melalui pengklonan, garisan monoklonal yang diperoleh daripada sel hibridoma tunggal, iaitu garisan sel hibridoma, boleh diperolehi.Antibodi yang dihasilkannya adalah antibodi yang sangat homogen terhadap penentu antigen yang sama, iaitu antibodi monoklonal.
 
Antibodi wujud sebagai satu atau lebih monomer berbentuk Y (iaitu, antibodi monoklonal atau antibodi poliklon).Setiap monomer berbentuk Y terdiri daripada 4 rantai polipeptida, termasuk dua rantai berat yang sama dan dua rantai ringan yang sama.Rantai ringan dan rantai berat dinamakan mengikut berat molekulnya.Bahagian atas struktur berbentuk Y ialah kawasan pembolehubah, iaitu tapak pengikatan antigen.(Petikan daripada Konsep Antibodi Bio-Monoklonal Detai)
 
Struktur antibodi
1rantai berat
Terdapat lima jenis rantai berat Ig mamalia, dinamakan dengan huruf Yunani α, δ, ε, γ, dan μ.Antibodi yang sepadan dipanggil IgA, IgD, IgE, IgG, dan IgM.Rantai berat yang berbeza berbeza dalam saiz dan komposisi.α dan γ mengandungi kira-kira 450 asid amino, manakala μ dan ε mengandungi kira-kira 550 asid amino.
Setiap rantai berat mempunyai dua kawasan: rantau malar dan rantau berubah.Semua antibodi daripada jenis yang sama mempunyai kawasan malar yang sama, tetapi terdapat perbezaan antara antibodi jenis yang berbeza.Kawasan malar rantai berat γ, α, dan δ terdiri daripada tiga domain Ig seiring, dengan kawasan engsel untuk meningkatkan fleksibilitinya;kawasan malar bagi rantai berat μ dan ε terdiri daripada 4 domain Ig.Kawasan pembolehubah rantai berat antibodi yang dihasilkan oleh sel B berbeza adalah berbeza, tetapi kawasan pembolehubah antibodi yang dihasilkan oleh sel B atau klon sel yang sama adalah sama, dan kawasan pembolehubah setiap rantai berat adalah kira-kira 110 asid amino panjangnya., Dan membentuk satu domain Ig.
 
Rantai ringan
Hanya terdapat dua jenis rantai ringan dalam mamalia: jenis lambda dan jenis kappa.Setiap rantai cahaya mempunyai dua domain berpaut: rantau malar dan rantau berubah-ubah.Panjang rantai cahaya adalah kira-kira 211~217 asid amino.Dua rantai ringan yang terkandung dalam setiap antibodi sentiasa sama.Bagi mamalia, rantai cahaya dalam setiap antibodi hanya mempunyai satu jenis: kappa atau lambda.Dalam beberapa vertebrata bawah, seperti ikan rawan (ikan rawan) dan ikan bertulang, jenis rantai ringan lain seperti jenis iota (iota) juga ditemui.
 
Segmen Fab dan Fc
Segmen Fc boleh digabungkan secara langsung dengan enzim atau pewarna pendarfluor untuk melabel antibodi.Ia adalah bahagian di mana antibodi melekat pada plat semasa proses ELISA, dan ia juga merupakan bahagian di mana antibodi kedua dikenali dan terikat dalam immunoprecipitation, immunoblotting dan imunohistokimia.Antibodi boleh dihidrolisiskan kepada dua segmen F(ab) dan satu segmen Fc oleh enzim proteolitik seperti papain, atau ia boleh dipecahkan dari kawasan engsel oleh pepsin dan dihidrolisiskan kepada satu segmen F(ab)2 dan satu segmen Fc.Serpihan antibodi IgG kadangkala sangat berguna.Disebabkan kekurangan segmen Fc, segmen F(ab) tidak akan memendakan dengan antigen, dan juga tidak akan ditangkap oleh sel imun dalam kajian in vivo.Oleh kerana serpihan molekul yang kecil dan kekurangan fungsi penghubung silang (disebabkan kekurangan segmen Fc), segmen Fab biasanya digunakan untuk pelabelan radio dalam kajian fungsi, dan segmen Fc digunakan terutamanya sebagai agen penyekat dalam pewarnaan histokimia.
 
Kawasan boleh ubah dan malar
Rantau pembolehubah (rantau V) terletak pada 1/5 atau 1/4 (mengandungi kira-kira 118 sisa asid amino) rantai H berhampiran terminal-N dan 1/2 (mengandungi kira-kira 108-111 residu asid amino) berhampiran terminal-N rantaian L .Setiap rantau V mempunyai cincin peptida yang dibentuk oleh ikatan disulfida intra-rantai, dan setiap cincin peptida mengandungi kira-kira 67 hingga 75 residu asid amino.Komposisi dan susunan asid amino di rantau V menentukan kekhususan pengikatan antigen antibodi.Disebabkan oleh jenis dan urutan asid amino yang sentiasa berubah di rantau V, pelbagai jenis antibodi dengan kekhususan antigen pengikat yang berbeza boleh dibentuk.Kawasan V rantai L dan rantai H dipanggil VL dan VH, masing-masing.Dalam VL dan VH, komposisi asid amino dan jujukan beberapa kawasan tempatan mempunyai tahap variasi yang lebih tinggi.Kawasan ini dipanggil kawasan hypervariable (HVR).Komposisi asid amino dan susunan bahagian bukan HVR di rantau V adalah agak konservatif, yang dipanggil rantau rangka kerja.Terdapat tiga kawasan hipervariable dalam VL, biasanya terletak pada residu asid amino masing-masing 24 hingga 34 dan 89 hingga 97.Tiga HVR VL dan VH dipanggil HVR1, HVR2 dan HVR3, masing-masing.Penyelidikan dan analisis pembelauan kristal sinar-X membuktikan bahawa kawasan hipervariable sememangnya tempat di mana antigen antibodi mengikat, jadi ia dipanggil rantau penentu komplementari (CDR).HVR1, HVR2 dan HVR3 VL dan VH masing-masing boleh dipanggil CDR1, CDR2 dan CDR3.Secara amnya, CDR3 mempunyai tahap hipervariabiliti yang lebih tinggi.Kawasan hipervariable juga merupakan lokasi utama di mana penentu idiotip molekul Ig wujud.Dalam kebanyakan kes, rantai H memainkan peranan yang lebih penting dalam mengikat antigen.
2Rantau malar (rantau C)terletak pada 3/4 atau 4/5 (kira-kira dari asid amino 119 ke terminal C) rantai H berhampiran terminal C dan 1/2 (mengandungi kira-kira 105 sisa asid amino) berhampiran terminal C rantai L.Setiap kawasan berfungsi rantai H mengandungi kira-kira 110 residu asid amino, dan mengandungi cincin peptida yang terdiri daripada 50-60 residu asid amino yang disambungkan oleh ikatan disulfida.Komposisi dan susunan asid amino rantau ini secara relatifnya tetap dalam rantai isotype L Ig haiwan yang sama dan rantai jenis H yang sama.Begitu juga, ia hanya boleh mengikat secara khusus kepada antigen yang sepadan, tetapi struktur rantau Cnya adalah sama, iaitu, ia mempunyai antigen yang sama.Antibodi sekunder IgG anti-manusia kuda (atau anti-antibodi) boleh digabungkan dengan dua kombinasi A antibodi (IgG) terhadap eksotoksin yang berbeza berlaku.Ini adalah asas penting untuk menyediakan antibodi sekunder dan menggunakan fluorescein, isotop, enzim dan antibodi berlabel lain.
 
 
Produk Berkaitan:
Kit RT-qPCR Langsung Sel

 

 


Masa siaran: Sep-30-2021