Soalan Lazim untukKit Pengasingan RNA Jumlah Haiwan

Analisis berikut tentang masalah yang mungkin anda hadapipengekstrakan tisu/RNA sel haiwan will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNA tidak diekstrak atau hasil RNA rendah

Selalunya terdapat pelbagai faktor yang mempengaruhi kecekapan pemulihan, seperti: kandungan RNA sampel tisu, kaedah operasi, isipadu elusi, dsb.

1. Emparan mandi ais atau kriogenik (4 °C) dilakukan semasa operasi.

Syor: Beroperasi pada suhu bilik (15-25 ° C) sepanjang keseluruhan proses, jangan mandi ais dan sentrifuge pada suhu rendah.

2. Pemeliharaan sampel yang tidak betul atau masa penyimpanan sampel yang berlebihan.

Syor: Simpan sampel pada -80 °C atau beku dalam nitrogen cecair dan elakkan penggunaan beku-cair berulang;cuba gunakan tisu segar atau sel kultur untuk pengekstrakan RNA.

3. Lisis sampel tidak mencukupi.

Syor: Apabila menghomogenkan tisu, pastikan tisu dihomogenkan secukupnya dan sel-sel tisu dipecahkan secukupnya untuk menerangkan pembebasan RNA.

4. Eluen tidak ditambah dengan betul.

Syor: Sahkan bahawa RNase-Free ddH₂O ditambah setitik demi setitik ke tengah membran lajur penulenan.

5. Isipadu etanol mutlak yang betul tidak ditambahkan pada Penampan RL2 atau Penampan RW2.

Syor: Ikut arahan, tambahkan isipadu etanol mutlak yang betul kepada Buffer RL2 dan Buffer RW2 dan gaul rata sebelum menggunakan kit.

6. Dos sampel tisu tidak sesuai.

Cadangan: Gunakan 10-20 mg tisu atau (1-5) × 10⁶sel setiap 500 μl penampan RL1, kerana penggunaan tisu yang berlebihan boleh mengakibatkan pengekstrakan RNA berkurangan.

7. Isipadu elusi tidak betul atau elusi tidak lengkap.

Syor: Isipadu elusi lajur penulenan ialah 50-200 μl;jika kesan elusi tidak memuaskan, adalah disyorkan untuk melanjutkan masa peletakan suhu bilik selepas menambah ddH Bebas RNase yang dipanaskan terlebih dahulu₂O, cth selama 5-10 min.

8. Lajur penulenan mempunyai sisa etanol selepas pencucian Penampan RW2.

Syor: Jika terdapat sisa etanol selepas mencuci Penampan RW2, sentrifugasi tiub kosong selama 1 minit, masa untuk operasi sentrifugasi tiub kosong boleh ditingkatkan kepada 2 minit, atau lajur penulenan boleh diletakkan pada suhu bilik selama 5 minit untuk mengeluarkan sisa etanol dengan secukupnya.

RNA yang disucikan terdegradasi

Kualiti RNA yang telah disucikan adalah berkaitan dengan faktor-faktor seperti pemeliharaan sampel, pencemaran RNase, dan manipulasi, dan lain-lain.

1. Sampel tisu tidak disimpan dalam masa.

Syor: Jika sampel tisu atau sel tidak digunakan tepat pada masanya selepas pengumpulan, segera simpan kriopsi pada -80 °C atau nitrogen cecair.Untuk mengekstrak RNA, gunakan tisu atau sampel sel yang baru diambil apabila boleh.

2. Pencairan beku berulang sampel tisu.

Syor: Apabila menyimpan sampel tisu, sebaiknya potong kecil-kecil untuk pemeliharaan, dan keluarkan salah satu kepingan apabila menggunakannya untuk mengelakkan pencairan beku berulang sampel dan degradasi RNA.

3. RNase diperkenalkan atau tidak memakai sarung tangan pakai buang, topeng, dsb. semasa operasi.

Syor: Eksperimen pengekstrakan RNA paling baik dilakukan dalam bilik manipulasi RNA yang berasingan dan jadual dibersihkan sebelum eksperimen.

Pakai sarung tangan dan topeng pakai buang semasa percubaan untuk meminimumkan kemerosotan RNA yang disebabkan oleh pengenalan RNase.

4. Reagen tercemar dengan RNase semasa digunakan.

Syor: Gantikan dengan Kit Pengasingan RNA Jumlah Haiwan baharu untuk eksperimen berkaitan.

5. Tiub emparan, petua, dsb. yang digunakan dalam manipulasi RNA tercemar dengan RNase.

Syor: Sahkan bahawa tiub emparan, petua, pipet, dsb. yang digunakan dalam pengekstrakan RNA semuanya Bebas RNase.

RNA yang diperolehi disucikan menjejaskan eksperimen hiliran

RNA disucikan oleh lajur penulenan, jika ion garam, kandungan protein yang terlalu besar akan menjejaskan eksperimen hiliran, seperti: transkripsi terbalik, Northern Blot et al.

1. RNA yang dielusi mempunyai sisa ion garam.

Syor: Sahkan bahawa isipadu etanol yang betul telah ditambahkan pada Penampan RW2 dan lakukan 2 pencucian lajur penulenan pada kelajuan emparan yang ditunjukkan untuk operasi;jika terdapat sebarang sisa ion garam, biarkan lajur penulenan ke Penampan RW2 selama 5 minit pada suhu bilik dan lakukan sentrifugasi untuk memaksimumkan penyingkiran pencemaran garam.

2. Sisa etanol dalam RNA yang dielusi.

Syor: Sahkan bahawa selepas pembasuhan penimbal RW2, lakukan operasi sentrifugasi tiub kosong pada kelajuan sentrifugasi yang ditunjukkan untuk operasi, tambahkan masa operasi sentrifugasi tiub kosong kepada 2 min jika masih terdapat sisa etanol, atau biarkan pada suhu bilik selama 5 minit selepas sentrifugasi tiub kosong untuk memaksimumkan penyingkiran sisa etanol.

Pengasingan jenis sampel asid nulseik

Kit Pengasingan RNA Foregene boleh mendapatkan pengasingan/pengekstrak RNA keseluruhan daripada sumber sampel berikut: Tisu haiwan, tumbuhan, sel, virus, darah, dsb.

Bagaimana saya menyimpan kit

Simpanan suhu bilik selama 24 bulan.