• facebook
  • linkedin
  • Youtube

Kit pengekstrakan DNA buccal swab/kad FTA

Analisis berikut kemungkinan masalah dalamBuccalsapu/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

 

Lajur penyucian tersumbat

 

 

Dalam kit ini, dalam operasi pengekstrakan DNA genomik, lajur penulenan diserap secara langsung pada sampel campuran lisis enzimatik tanpa langkah sentrifugasi, dan lajur penulenan mungkin disekat disebabkan oleh enzimisasi yang tidak lengkap dan kelikatan sampel yang tinggi.

Kemungkinan penyebab berikut adalah seperti berikut:

1. Pencernaan enzimatik sampel tisu yang tidak lengkap.

Syor: Masa pemprosesan sampel Foregene Protease boleh dilanjutkan dengan sewajarnya atau supernatan boleh diambil selepas sentrifugasi pada 12,000 rpm (~13,400× g) selama 5 minit.

2. Penggunaan sampel tisu atau tisu besar secara berlebihan.

Cadangan: Sebaik-baiknya tidak melebihi 1Buccal sapu dalam sampel;jika sampel terlalu besar, tambahkan dos Penampan ST1, Foregene Protease, penimbal ST2 dengan sewajarnya.

3. Kelikatan sampel terlalu tinggi.

Syor: Sampel boleh dicairkan dengan sewajarnya dengan 10 mM Tris-HCl sebelum pengekstrakan DNA genomik.

4. Serpihan kad darah telah disedut.

Syor: Masa sentrifugasi sementara bagi langkah 6 pengekstrakan genom bintik darah (Kad FTA) boleh dilanjutkan dengan sewajarnya.

 

Hasil rendah atau tiada DNA

 

Selalunya terdapat pelbagai faktor yang mempengaruhi hasil DNA genom, termasuk asal sampel, keadaan penyimpanan sampel, penyediaan sampel, manipulasi, dsb.

DNA genom tidak boleh diperoleh semasa pengekstrakan

Penyebab yang mungkin adalah seperti berikut:

1. Pemeliharaan sampel atau penyimpanan yang tidak betul untuk terlalu lama membawa kepada degradasi DNA genomik.

Syor: Sapuan oral sebaiknya diambil sampelnya yang baru, dan tidak digalakkan menggunakan sapuan yang diawet untuk operasi pengekstrakan DNA genomik;sampel bintik darah hendaklah memastikan kualitinya memenuhi syarat dan masa penyimpanan tidak boleh terlalu lama.

2. Penggunaan tisu yang terlalu sedikit boleh mengakibatkan tiada pengekstrakan DNA genomik yang sepadan.

Cadangan: Ikutibuccal arahan pensampelan swab dalam panduan operasi, dan lap seberapa banyak kali yang mungkin supaya sel yang mencukupi boleh dilekatkan pada swab oral untuk pengekstrakan DNA genomik;untuk pengekstrakan sampel bintik darah, kawasan pemotongan bintik darah boleh ditingkatkan dengan sewajarnya.

3. Foregene Protease tidak dipelihara dengan betul, mengakibatkan penurunan dalam aktiviti atau ketidakaktifannya.

Syor: Sahkan syarat penyimpanan bagiForegene Protease atau gantikannya dengan Foregene Protease yang baharu untuk tindak balas enzimatik.

4. Pemeliharaan kit yang tidak betul atau masa penyimpanan terlalu lama, mengakibatkan kegagalan beberapa komponen dalam kit.

Cadangan: Beli yang baruBuccal sapu DNApengasingan kit untuk prosedur yang berkaitan.

5. Penampan WB tidak menambah etanol mutlak.

Syor: Sahkan bahawa penimbal WB menambah isipadu etanol mutlak yang betul.

6. Eluen tidak ditambah dengan betul pada filem silikon.

Syor: Tambah 65°Celuen pra-panas jatuh ke tengah membran silikon dan biarkan pada suhu bilik selama 5 minit untuk meningkatkan kecekapan elusi.

LDNA genomik ow-yield terpencil

Kemungkinan penyebab berikut adalah seperti berikut:

1. Pemeliharaan sampel atau penyimpanan yang tidak betul untuk terlalu lama membawa kepada degradasi DNA genomik.

Syor: Sapuan oral sebaiknya diambil sampel yang baru, dan sapuan yang diawet tidak boleh digunakan untuk pengekstrakan DNA genomik.

2. Jika jumlah sampel tisu terlalu kecil, kandungan DNA genomik yang diekstrak akan menjadi kurang.

Syor: Ikuti arahan pensampelan swab oral dalam panduan operasi, lap seberapa banyak kali yang mungkin supaya sel yang mencukupi boleh dilekatkan pada swab oral untuk pengekstrakan DNA genomik.

3. Foregene Protease tidak dipelihara dengan betul, mengakibatkan penurunan dalam aktiviti atau ketidakaktifannya.

Syor: Sahkan syarat penyimpanan bagithe Foregene Protease atau gantikan dengan yang baru Foregene Protease untuk tindak balas enzimatik.

4. Masalah eluen.

Syor: Gunakan Buffer EB untuk elusi;jika menggunakan ddH2O atau eluen lain, sahkan bahawa pH eluat adalah antara 7.0-8.5.

5. eluat tidak ditambah dengan betul secara titisan.

Syor: Tambah titisan eluen ke tengah membran silikon dan biarkan pada suhu bilik selama 5 minit untuk meningkatkan kecekapan elusi.

6. Cecair elusi terkumpul terlalu sedikit.

Syor: Gunakan eluen untuk elusi DNA genom seperti yang diperlukan dalam arahan, sekurang-kurangnyatidak kurang juga daripada 15μl.

Low kesucian of DNA genomikterpencil

Ketulenan DNA genomik yang rendah boleh menyebabkan kegagalan atau keputusan yang tidak memuaskan dalam eksperimen hiliran, seperti: enzim tidak boleh dipotong terbuka, PCR tidak boleh mendapatkan serpihan gen yang diminati, dsb.

Penyebab yang mungkin adalah seperti berikut:

1. Pencemaran heteroprotein, pencemaran RNA.

Analisis: Lajur penulenan tidak dibasuh menggunakan Penampan PW;lajur penulenan pencuci Penimbal PW tidak dibasuh menggunakan kelajuan emparan yang betul.

Syor: Pastikan tiada pemendakan dalam supernatan sebelum menambah etanol;pastikan anda mencuci lajur penulenan mengikut arahan, dan langkah ini tidak boleh ditinggalkan.

2. Pencemaran ion kekotoran.

Analisis: Lajur penulenan pencucian Penimbal WB telah ditinggalkan atau dibasuh sekali sahaja, mengakibatkan pencemaran ionik sisa.

Syor: Pastikan anda mencuci Penampan WB 2 kali seperti yang diarahkan untuk mengeluarkan ion sisa sebanyak mungkin.

3. Pencemaran enzim RNA.

Analisis: RNases asing telah ditambahkan pada penimbal;Operasi pencucian Penampan PW tidak betul, mengakibatkan sisa RNase, menjejaskan operasi percubaan RNA hiliran, seperti transkripsi in vitro.

Syor: Asid nukleik siri foregeneisolakit boleh mengeluarkan RNA tanpa penambahan RNase tambahan,dengan demikian Kit Pengasingan DNA Kad Swab/FTA buccalperlu't tambah RNase;pastikan anda mengikuti arahan untuk lajur penulenan pencucian Penimbal PW, dan langkah ini tidak boleh ditinggalkan.

4. Sisa etanol.

Analisis: Penampan WB tidak melakukan sentrifugasi tiub kosong selepas mencuci lajur penulenan.

Syor: Lakukan operasi sentrifugasi tiub kosong yang betul mengikut arahan.

5. Pencemaran kekotoran lain.

Analisis: Sampel yang disimpan atau sampel khas tidak dirawat terlebih dahulu.

Syor: Prarawat sampel dengan teliti seperti yang diarahkan.

 


Masa siaran: Mac-18-2022