• facebook
  • linkedin
  • Youtube

Kaedah PCR dan pencemaran aerosol asid nukleik di makmal ujian asid nukleik adalah seperti dua sisi syiling.Kita hanya boleh memilih untuk memilikinya atau tidak, tetapi kita tidak boleh memilih sama ada mahu atau membelanjakannya.

pencemaran1

1. Pemeriksaan penyingkiran DNA

Untuk mencapai penyingkiran spatial pencemaran aerosol asid nukleik, pertama sekali perlu menyaring penyingkiran DNA yang boleh mengeluarkan asid nukleik dalam keadaan cair.Sebab tak banyak DNA remover yang betul-betul berkesan.Untuk kaedah eksperimen, sila rujuk: Penghapus DNA tidak boleh menjadi "sudut rahsia" makmal!

Dalam eksperimen ini, 100 salinan/μL (CT kira-kira 31) plasmid ASFV dan penghilang DNA yang dikira oleh PCR digital dicampur dalam jumlah yang sama, dan kemudian bertindak balas pada suhu bilik selama 10 minit, 20 minit dan 30 minit masing-masing.Selepas pengekstrakan asid nukleik, penguatan qPCR telah dijalankan.Kawalan positif bercampur dengan plasmid dan air dibandingkan.Memandangkan eksperimen tidak selesai pada masa yang sama, mungkin terdapat sisihan tertentu antara keputusan, tetapi ia tidak menjejaskan kesimpulan eksperimen.Setakat ini, saya telah menilai 10 produk penghilang DNA komersial.Hanya produk No. 1, No. 6 dan No. 8 yang boleh merendahkan DNA plasmid dalam keadaan cair dengan berkesan.Produk lain hampir tiada kesan.

Jadual 1 Kesan penyingkiran asid nukleik bagi penyingkiran DNA yang tersedia secara komersial

pencemaran2

2. Eksperimen kesan penyingkiran DNA bagi pembasmi kuman yang biasa digunakan

1. Saringan pembasmi kuman yang biasa digunakan

Terdapat banyak jenis pembasmi kuman yang biasa digunakan di makmal: aldehid, fenol, alkohol, garam ammonium kuaterner, peroksida, sediaan klorin, dan asid dan bes.Kesan pembasmian kuman pembasmi kuman ini ke atas mikroorganisma telah disahkan sepenuhnya oleh eksperimen, tetapi Tiada data eksperimen yang mencukupi tentang kesan degradasi asid nukleik.Makmal ujian asid nukleik memerlukan pembasmi kuman yang bukan sahaja mempunyai kesan pembasmian kuman yang baik pada mikroorganisma, tetapi juga boleh merendahkan DNA.Keputusan ujian menunjukkan hanya dua sediaan klorin bagi 84 disinfektan dan asid trichloroisocyanuric dan 1 M asid hidroklorik memenuhi keperluan.Memandangkan 1 M asid hidroklorik sangat menghakis, adalah disyorkan bahawa sediaan klorin digunakan sebagai pelupusan sisa di makmal ujian asid nukleik.Walau bagaimanapun, sediaan klorin adalah menghakis logam dan tidak boleh digunakan untuk pembasmian kuman instrumen dan peralatan.

Jadual 2 Kesan penyingkiran DNA pelbagai jenis pembasmi kuman

pencemaran3

2. Kepekatan efektif minimum sediaan klorin

Pembasmi kuman berasaskan klorin mempunyai kesan kemerosotan DNA yang kuat, tetapi disebabkan kekakisan dan kerengsaan logamnya, ia boleh digunakan untuk membersihkan lantai, kaunter bukan logam, hujung rendaman, tiub emparan dan item ujian lain.

Menurut "Garis Panduan Teknikal Pembasmian Kuman Epidemik Coronary Pneumonia Baharu": Bahan pencemar (darah, rembesan dan muntah pesakit) tersedia klorin 5g/L-10g/L pembasmi kuman yang mengandungi klorin;lantai, dinding dan permukaan objek menggunakan klorin yang tersedia 1g/L Pembasmi kuman klorin: pakaian, peralatan tempat tidur dan tekstil lain terlebih dahulu direndam dalam pembasmi kuman klorin dengan 0.5g/L klorin tersedia selama 30 minit, dan kemudian dibersihkan seperti biasa.

Jadual 3 Kesan penyingkiran DNA kepekatan berbeza pembasmi kuman klorin

pencemaran4

Keputusan ujian menunjukkan bahawa: apabila kepekatan klorin berkesan lebih besar daripada atau sama dengan 1.2 g/L, pembasmi kuman yang mengandungi klorin boleh merendahkan sepenuhnya 100 salinan/μL plasmid apabila ia digunakan selama 5 minit.Apabila bertindak selama 10 minit, 84 pembasmi kuman dengan kepekatan klorin berkesan lebih besar daripada atau sama dengan 0.6 g/L boleh merendahkan sepenuhnya 100 salinan/μL plasmid.

3. Eksperimen penyingkiran udara tercemar oleh aerosol asid nukleik

Bagaimana untuk membersihkan udara yang tercemar oleh aerosol asid nukleik?Kebanyakan pemikiran adalah untuk mewujudkan persekitaran yang tercemar aerosol dan kemudian membersihkannya, atau untuk membersihkan asid nukleik selepas pencemaran.Bagi saya, eksperimen yang tidak boleh diulang dan keputusan eksperimen tidak boleh dianalisis secara kuantitatif adalah tidak bermakna, jadi saya meminjam beberapa kaedah pembasmian kuman udara.Lihat "GB27948-2020 Keperluan Am untuk Pembasmi Kuman Udara" dan "Spesifikasi Teknikal Pembasmian Kuman"

1. Bahan ujian

1.1 Pembuang DNA: Dalam eksperimen ini, dua penyingkiran DNA 6 dan 8 yang tersedia secara komersial dalam Jadual 1 telah dipilih.

1.2 Plasmid ujian: Memandangkan nilai CT kebanyakan pencemaran makmal akan lebih tinggi daripada 30, kepekatan plasmid gen ASFV yang digunakan kali ini adalah kira-kira 100 salinan/μL, dan CT PCR kuantitatif pendarfluor adalah kira-kira 31.07.Masukkan plasmid ke kapas berkelompok dan keringkan di udara.

pencemaran5

1.3 Instrumen ujian: Instrumen pembasmian kuman Bilingkehan KVBOX, yang disokong oleh Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., mempunyai prestasi pembasmian kuman udara yang sangat baik dengan pembasmi kuman hidrogen peroksida, dan boleh membunuh spora dan mikroorganisma lain dengan berkesan.

pencemaran6

1.4 Ruang ujian: tingkap pemindahan tertutup kira-kira 0.1 meter padu.

2. Kaedah ujian

pencemaran7

Jumlah pembasmian kuman yang ditetapkan pada mesin pembasmian kuman ialah 10ml, dan kepekatannya ialah 100ml/m3, yang jauh lebih tinggi daripada "GB27948-2020 Keperluan Am untuk Pembasmi Kuman Udara": apabila menggunakan pembasmian kuman semburan aerosol, jumlah pembasmi kuman hendaklah ≤10 ml/m3

pencemaran8
pencemaran10
pencemaran9
pencemaran11

Selepas penyemburan, ia dimeterai selama 2 jam, dan kemudian swab berbondong-bondong dengan plasmid dielusi dengan TE, dan swab berbondong-bondong dengan plasmid tanpa pengasapan ditetapkan sebagai kawalan.Gunakan kaedah PCR kuantitatif pendarfluor untuk pengesanan.

Jadual 4 Keputusan ujian penyingkiran asid nukleik udara

pencemaran12

3. Keputusan ujian

Dua jenis penyingkiran DNA yang boleh merendahkan plasmid secara berkesan dalam keadaan cair tidak mempunyai kesan sama sekali dalam eksperimen penyingkiran asid nukleik udara.Saya tidak sabar-sabar untuk mencari penyelesaian yang boleh digunakan untuk menghapuskan pencemaran aerosol asid nukleik di udara untuk menyelesaikan sepenuhnya masalah pencemaran aerosol asid nukleik di makmal ujian asid nukleik, tetapi tiada produk sedemikian ditemui buat masa ini.Saya percaya bahawa pada masa akan datang, akan ada penyingkiran asid nukleik berprestasi tinggi yang boleh digunakan untuk penyingkiran asid nukleik udara.

4. Tinggalkan ilusi dan fokus pada pencegahan

Tidak kira bagaimana syarikat bermegah tentang produk penyingkiran asid nukleik mereka, saya mencadangkan bahawa majoriti rakan yang terlibat dalam ujian asid nukleik melepaskan ilusi sekali dan untuk semua dan mengenali realiti: adalah sangat sukar untuk mengeluarkan udara yang tercemar oleh aerosol asid nukleik, atau mengambil langkah pencegahan yang kukuh dan kerja pemantauan harian!

pencemaran13


Masa siaran: Sep-10-2021