Pengarang: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Unit: Hospital Jiaozhou, Hospital Dongfang Bergabung dengan Universiti Tongji

Pada masa ini, jenis sampel utama untuk pengesanan asid nukleik patogen pernafasan adalah swab tekak.Terdapat banyak jenis penyelesaian pemeliharaan sampel yang biasa digunakan, kesemuanya perlu disejukkan atau dibekukan untuk pengangkutan dan penyimpanan;Sukar untuk mengawal keseluruhan proses suhu rendah semasa proses pengumpulan dan pengangkutan, dan sukar untuk memastikan kawalan kualiti sebelum ujian sampel^[1-2].

RNase (RNase) ialah endonuklease yang menghidrolisis RNA, terutamanya memutuskan ikatan fosfodiester antara nukleotida.Molekul RNase sangat stabil, terdapat ikatan disulfida dalam struktur, dan aktivitinya tidak memerlukan kehadiran kation divalen, jadi RNase tidak mudah didenaturasi, dan ia mudah untuk diubah semula walaupun selepas suhu tinggi atau penggunaan denaturan.RNases dibahagikan kepada endogen dan eksogen.RNases endogen boleh dibebaskan pada masa yang sama apabila sel-sel pecah.Oleh itu, menghapuskan peranan RNases endogen adalah langkah yang sangat kritikal dalam proses pengekstrakan RNA.RNases eksogen diedarkan secara meluas.RNases wujud di udara, kulit manusia, rambut dan air liur, yang merupakan sebab penting untuk degradasi RNA yang mudah.^[3].

Pertanyaan data

CANS-CL02-A009 "Pemakaian Garis Panduan Pentauliahan Kualiti dan Kecekapan Makmal Perubatan dalam Bidang Diagnosis Molekul" dalam keperluan teknikal mencadangkan bahawa piawaian kualiti air yang sesuai harus dirumus mengikut aplikasi;Bekas kedap udara pakai buang:

RNase/Pengkelasan

(1) RNase A

Ribonuclease A (RNase A), yang berasal daripada pankreas lembu, ialah endoribonuclease yang secara khusus boleh menyerang hujung 3' sisa pirimidin pada RNA, memotong sitosin atau urasil yang dibentuk oleh nukleotida bersebelahan.Ikatan fosfodiester, hasil akhir tindak balas ialah nukleotida pirimidin 3′ dan oligonukleotida dengan nukleotida pirimidin 3′ pada penghujungnya.

(2) RNase T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) berasal daripada Aspergillus orjzae, ia secara khusus bertindak pada fosfat 3'-terminal guanin, dan tapak belahan adalah antara 3' fosfat guanin dan 5' hidroksil nukleotida bersebelahan.Hasil akhir tindak balas ialah serpihan asid 3′guanylic dan oligonukleotida dengan asid 3′guanylic pada hujungnya.

(3) RNase H

Ribonuclease H (RNase H) pertama kali ditemui daripada tisu timus anak lembu, dan gen pengekodannya telah diklonkan ke dalam Escherichia coli.Ia secara khusus boleh merendahkan DNA: Helai RNA dalam dupleks hibrid RNA, menghasilkan oligonukleotida dan mononukleotida dengan hujung 3'-OH dan 5'-monofosfat, ia tidak boleh merendahkan DNA atau RNA untai tunggal atau dua.

RNase

Fungsi dan kegunaan

Ribonuclease boleh memangkinkan degradasi asid ribonukleik (RNA) dan boleh disintesis secara buatan.Salap ubat digunakan secara topikal untuk merawat trauma dan sakit sendi.Menurut laporan, ribonuclease boleh mengubah metabolisme sel perumah, menghalang sintesis virus, menghalang percambahan virus influenza secara in vitro, dan menghalang pembentukan virus vaccinia dan herpes dalam embrio ayam.Penggunaan klinikal ribonuclease suntikan intramuskular harian sebanyak 180 mg, bermanfaat untuk rawatan ensefalitis epidemik, ribonuclease boleh memangkinkan degradasi asid ribonukleik (RNA), dan kini boleh disintesis secara buatan.Salap ubat digunakan secara topikal untuk merawat trauma dan sakit sendi.Menurut laporan, ribonuclease boleh mengubah metabolisme sel perumah, menghalang sintesis virus, menghalang percambahan virus influenza secara in vitro, dan menghalang pembentukan virus vaccinia dan herpes dalam embrio ayam.Penggunaan klinikal ribonuclease suntikan intramuskular harian sebanyak 180 mg bermanfaat untuk rawatan ensefalitis epidemik.

RNase

Definisi Inhibitor

Definisi unit perencat RNase: Jumlah enzim yang diperlukan untuk menghalang 50% daripada aktiviti 5ng RNase A ialah satu unit.

Cara Perencat RNase Berfungsi

Guanidine isothiocyanate:

Guanidine isothiocyanate ialah sebatian organik dengan formula molekul C2H6N4S.Terutamanya digunakan dalam perubatan biologi, reagen kimia, dan lain-lain. Guanidine isothiocyanate ialah agen pemisahan protein, dan ia sering digunakan sebagai komponen utama larutan lisis dalam reagen diagnostik molekul.Ia boleh melisiskan tisu, memusnahkan struktur sel dan mengasingkan asid nukleik daripada nukleoprotein, dan mempunyai denaturasi yang kuat kepada RNase.Ia adalah perencat RNase yang paling berkesan pada masa ini.

TRIzol ialah reagen pengekstrakan total RNA novel yang boleh mengekstrak secara langsung jumlah RNA daripada sel atau tisu.Ia mengandungi bahan seperti fenol dan guanidine isothiocyanate, yang boleh mengganggu sel dengan cepat dan menghalang nuklease yang dikeluarkan oleh sel.

(Walau bagaimanapun, guanidine isothiocyanate berbahaya untuk kesihatan penyelidik makmal.)

RNasin:

Glikoprotein asid diekstrak daripada hati tikus atau blastoderm manusia.Rnasin ialah perencat RNase bukan kompetitif, yang boleh mengikat pelbagai RNases untuk menyahaktifkannya.

(Butiran lanjut:https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hsuhu igh:

Suhu tinggi juga merupakan cara biasa denaturasi protein.

Diethylpirokarbonat (DEPC):

DEPC ialah perencat RNase yang kuat tetapi tidak lengkap, yang boleh menghalang aktiviti RNase dengan menggabungkan dengan cincin imidazol asid amino kumpulan aktif RNase untuk menyahtukarkan protein.

Kompleks Vanadyl ribonucleoside:

Kompleks yang dibentuk oleh ion vanadium oksida dan nukleosida, yang mengikat kepada RNase dalam bentuk bahan peralihan, yang hampir boleh menghalang aktiviti RNase sepenuhnya.

lain-lain:

SDS, urea, bumi diatom, dsb. juga mempunyai kesan perencatan tertentu pada RNase.

Ulasan Pakar

Li Yujie Ketua Juruteknik

Pengarah Jabatan Makmal, Hospital Jiaozhou, Hospital Dongfang Bergabung dengan Universiti Tongji

Untuk mengelakkan biodegradasi RNase eksogen, topeng, sarung tangan dan topi hendaklah dipakai dan diganti dengan kerap semasa proses pengekstrakan RNA.Semua barangan kaca mesti dibakar dalam ketuhar pengeringan pada suhu 200°C selama lebih daripada 2 jam.Bahan yang digunakan untuk membakar, seperti plastik, perlu dirawat dengan air DEPC, dan kemudian dibasuh dengan air suling.Reagen atau peranti yang digunakan untuk pengekstrakan, pemeliharaan dan pengenalpastian RNA hendaklah dikhususkan kepada RNA, dan kawasan operasi RNA bebas hendaklah disediakan.

rujukan:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Bakteria dan virus dalam nasofaring sejurus sebelum permulaan jangkitan pernafasan bawah akut pada kanak-kanak Orang Asli Australia[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Cawangan Kawalan Jangkitan Hospital Persatuan Perubatan Pencegahan Cina.Garis panduan untuk pengumpulan dan pemeriksaan spesimen mikrob klinikal [J].Jurnal Cina Jangkitan Hospital, 2018(20):3192-3200.

[3] "Ujian Klinikal Sepuluh Ribu Mengapa Jumlah Ujian Biologi Molekul"