Ciri luar biasa tindak balas PCR ialah kapasiti amplifikasi yang besar dan kepekaan yang sangat tinggi.Untuk meningkatkan prestasi PCR dan kecekapan pengesanan, kami komited untuk meningkatkan kapasiti amplifikasi PCR dan kepekaan pengesanan, tetapi sakit kepala sedang dalam proses percubaan.Positif palsu sering berlaku, dan sejumlah kecil pencemaran silang sampel atau pencemaran produk PCR boleh menyebabkan positif palsu dalam eksperimen.
Lima jenis pencemaran produk PCR
Terdapat banyak sebab untuk pencemaran PCR, yang boleh dibahagikan secara kasar kepada kategori berikut:
Pencemaran spesimen terutamanya disebabkan oleh pencemaran bekas untuk mengumpul spesimen, atau apabila spesimen diletakkan, ia bocor keluar dari bekas kerana pengedap yang longgar, atau spesimen itu melekat pada bahagian luar bekas, yang menyebabkan pencemaran silang;Pencemaran membawa kepada pencemaran antara spesimen;sesetengah spesimen mikrob, terutamanya virus, boleh merebak dengan aerosol atau membentuk aerosol, mengakibatkan pencemaran bersama.
Sebab utama ialah semasa penyediaan reagen PCR, pistol sampel, bekas, air suling berganda dan penyelesaian lain dicemari oleh templat asid nukleik PCR.
Dalam makmal biologi molekul dan beberapa makmal yang menggunakan plasmid klon sebagai kawalan positif, masalah pencemaran plasmid klon juga biasa berlaku.Kerana kandungan plasmid pengklonan dalam jumlah unit agak tinggi, dan lebih banyak alat dan reagen diperlukan dalam proses penulenan, dan plasmid dalam sel hidup berkemungkinan besar tercemar disebabkan oleh pertumbuhan yang kuat dan keupayaan pembiakan sel hidup.
Pencemaran produk yang dikuatkan adalah masalah pencemaran yang paling biasa dalam tindak balas PCR.Oleh kerana kuantiti salinan produk PCR adalah besar (biasanya 1013 salinan/ml), yang jauh lebih tinggi daripada had nombor salinan pengesanan PCR, jumlah pencemaran produk PCR yang sangat kecil boleh menyebabkan positif palsu.
Pencemaran aerosol adalah bentuk pencemaran produk PCR yang paling mungkin, dan ia juga paling mudah untuk diabaikan.Ia terbentuk oleh geseran antara permukaan cecair dan udara.Secara amnya, pencemaran aerosol boleh terbentuk apabila penutup dibuka, apabila sampel disedut, atau bahkan apabila tiub tindak balas digoncang dengan kuat.Mengikut pengiraan, zarah aerosol boleh mengandungi 48,000 salinan, jadi pencemaran yang disebabkan olehnya adalah masalah yang patut diberi perhatian khusus.
Khususnya, makmal ujian sering menggunakan pasangan primer yang sama untuk menguji gen tertentu.Lama kelamaan, sejumlah besar pencemaran produk PCR akan berlaku di ruang makmal.Sebaik sahaja pencemaran itu berlaku, sukar untuk menghapuskannya dalam masa yang singkat.
Untuk tiga jenis pencemaran pertama, kita boleh menggunakan cara yang berkesan untuk mengelakkan, tetapi pencemaran yang disebabkan oleh produk PCR sukar dicegah, terutamanya dalam pembinaan makmal PCR yang tidak standard.Dalam proses PCR, apabila hujung pipet menghisap dan meniup cecair, dan penutup tiub PCR dibuka, aerosol akan terbentuk.Molekul DNA yang dibawa oleh aerosol (satu aerosol boleh membawa puluhan ribu DNA) sukar untuk dihapuskan kerana ia terapung di udara.Sebaik sahaja percubaan PCR pusingan seterusnya diperkenalkan, positif palsu pasti akan berlaku.
Seperti yang ditunjukkan dalam rajah di bawah, kawalan negatif juga menguatkan jalur minat yang sepadan:
Bahagian pertama isu pencemaran dan pencegahan PCR ini diperkenalkan di sini.Isu seterusnya akan membawakan anda bahagian kedua "Pencegahan pencemaran produk PCR", jadi nantikan!
Masa siaran: Jul-25-2017
