Wujudkan SOP percubaan PCR untuk menyeragamkan tingkah laku kakitangan eksperimen.
Penguji dengan tegas mematuhi prosedur operasi, dan meminimumkan pencemaran PCR yang mungkin disebabkan oleh faktor manusia atau menghalang berlakunya pencemaran.Di samping itu, penguji perlu mempunyai pengetahuan dan kemahiran profesional yang sepadan, termasuk kecekapan dalam mengendalikan peralatan berkaitan, menjelaskan keseluruhan proses kerja, menguasai kaedah rawatan pencemaran dan kaedah kawalan kualiti makmal, dan dapat mentafsir keputusan ujian dengan betul.
Wujudkan makmal PCR standard.
Makmal PCR terbahagi kepada empat kawasan secara prinsip iaitu kawasan penyediaan reagen, kawasan pemprosesan sampel, kawasan amplifikasi, dan kawasan analisis produk amplifikasi.Dua kawasan pertama ialah kawasan pra-amplifikasi, dan dua kawasan terakhir ialah kawasan pasca-amplifikasi.Zon pra-amplifikasi dan zon pasca-amplifikasi hendaklah dipisahkan dengan ketat.Bahan eksperimen, reagen, kertas rakaman, pen, bahan pembersih, dsb., hanya boleh mengalir dari kawasan pra-amplifikasi ke kawasan pasca amplifikasi, iaitu, dari kawasan penyediaan reagen → kawasan pemprosesan sampel → kawasan amplifikasi → kawasan analisis produk penguatan, dan tidak boleh mengalir ke belakang .Aliran udara dalam makmal juga harus mengalir dari kawasan pra-amplifikasi ke kawasan pasca amplifikasi, dan tidak mengalir ke belakang.Reka bentuk makmal PCR yang ideal ditunjukkan di bawah:
Rajah A: Mod persediaan makmal PCR yang ideal dengan tekanan negatif di dalam bilik penampan
Rajah B: Mod persediaan makmal PCR yang ideal dengan tekanan positif di dalam bilik penampan
Gambar rajah persediaan makmal PCR yang diberikan dalam Rajah A dan Rajah B sepatutnya menjadi mod persediaan yang lebih ideal, dan makmal dengan keadaan boleh merujuk kepada mod ini untuk reka bentuk.Untuk makmal biasa, adalah disyorkan bahawa kawasan amplifikasi PCR dan kawasan analisis produk boleh dipisahkan, dan pembukaan penutup hendaklah dikurangkan sebanyak mungkin di kawasan penyediaan sampel dan kawasan amplifikasi PCR.Ingat: Produk dan bekalan eksperimen dalam kawasan analisis produk dilarang sama sekali dibawa ke kawasan penyediaan sampel dan kawasan amplifikasi PCR.
Jika makmal hanya menjalankan pengesanan dan pengecaman PCR, adalah disyorkan untuk menggunakan PCR kuantitatif pendarfluor dan bukannya PCR konvensional.
Keputusan pengesanan PCR kuantitatif pendarfluor boleh dikumpul dan dianalisis oleh isyarat pendarfluor, jadi tidak perlu membuka penutup untuk elektroforesis selepas tindak balas, yang mengelakkan pencemaran produk PCR yang disebabkan oleh kebocoran produk tindak balas untuk membentuk aerosol.Jika anda menambah bilangan bukaan penutup semasa langkah pemuatan elektroforesis gel, pencemaran aerosol mungkin berlaku.Adalah disyorkan untuk menggalakkan penggunaan PCR kuantitatif dan menggantikan PCR kualitatif secara beransur-ansur.
Sistem pencemaran produk anti-PCR UNG digunakan untuk tindak balas PCR.
Sistem menggunakan dUTP dan bukannya dTTP.Selepas tindak balas PCR, semua produk PCR (serpihan DNA) digabungkan dengan dUTP;dalam pusingan seterusnya tindak balas PCR, enzim UNG yang ditambahkan pada sistem diinkubasi pada 37°C selama 5 minit sebelum PCR, yang secara khusus boleh merendahkan semua serpihan DNA yang mengandungi dUTP, dan kemudian melakukan tindak balas PCR.Ini boleh membuang sepenuhnya pencemaran aerosol yang disebabkan oleh produk PCR.Kesannya ditunjukkan dalam rajah di bawah:
Nota: Untuk siri PCR langsung, anda boleh memilih produk siri sistem pencemaran produk anti-PCR ForegeneCadangkan
Bagi makmal yang menjalankan ujian genotaip berskala besar, amat disyorkan untuk menggunakan sistem pencemaran produk anti-PCR UNG untuk menguji reagen sebagai tambahan kepada pembinaan makmal yang munasabah.
Peringatan: Penggunaan sistem ini tidak boleh membuang pencemaran produk PCR yang telah berpunca.Oleh itu, sistem UNG harus digunakan pada permulaan ujian yang berkaitan, dan sistem UNG harus digunakan untuk penguatan PCR, untuk mengelakkan pencemaran produk PCR False positive.
Adalah disyorkan untuk menggunakan sistem Direct PCR-UNG Foregene semasa menjalankan ujian berskala besar, seperti:
Kit PCR Langsung Daun Tumbuhan-UNG；
Kit PCR Langsung Benih Tanam-UNG；
Kit PCR Langsung Tisu Haiwan-UNG；
Kit PCR Langsung Ekor Tetikus-UNG；
Kit PCR Langsung Ikan Zebra-UNG。
Siri kit ini daripada Foregenebukan sahaja boleh melakukan pengesanan PCR dengan cepat dan dalam skala besar, tetapi juga berkesan mencegah dan mengawal pencemaran produk PCR.
Masa siaran: Mac-19-2021
