memimpin

RNA bukan pengekodan panjang, lncRNA ialah RNA bukan pengekodan dengan panjang lebih daripada 200 nukleotida, secara amnya antara 200-100000 nt.lncRNA mengawal ekspresi gen pada tahap epigenetik, transkripsi dan pasca transkripsi, dan mengambil bahagian dalam pembungkaman kromosom X, pencetakan genom dan pengubahsuaian kromatin, pengaktifan transkripsi, gangguan transkripsi, pengangkutan nuklear, pengawalan kitaran sel, pengawalseliaan pembezaan sel, dan kesan pampasan dos (dose kesan yang berkaitan dengan perkembangan manusia) dan pencegahan kesan pampasan yang berkaitan dengan manusia) , dan kini merupakan salah satu tempat hangat dalam bidang bioperubatan.

01  Jenis dan ciri LncRNA

lncRNA dibahagikan kepada banyak jenis mengikut sumber pembentukannya yang berbeza, seperti yang ditunjukkan dalam rajah di atas.Mempunyai ciri-ciri berikut:

1. lncRNA biasanya lebih panjang, dengan ekspresi dinamik dan kaedah penyambungan yang berbeza semasa pembezaan
2. Berbanding dengan gen pengekodan, lncRNA biasanya mempunyai tahap ekspresi yang lebih rendah
3. Kebanyakan lncRNA mempunyai kekhususan ekspresi temporal dan spatial yang jelas dalam proses pembezaan dan perkembangan tisu
4. Terdapat ungkapan ciri dalam tumor dan penyakit lain
5. Lokasi subselular lncRNA adalah pelbagai
6. Urutan adalah rendah dalam pemuliharaan, tetapi fungsi mempunyai tahap pemuliharaan tertentu, dsb.

02 Soalan Lazim tentang LncRNA Reverse Transcription

Disebabkan kandungan lncRNA yang rendah dalam sel, panjang panjang dan struktur aras tinggi, RNA tersebut selalunya mempunyai struktur kompleks seperti gelung batang atau jepit rambut, dan RT-qPCR terdedah kepada masalah transkripsi terbalik yang tidak berjaya atau kecekapan rendah.

03 Penyelesaian transkripsi terbalik LncRNA

Dalam peraturan pusat, proses virus RNA menggunakan transkripase terbalik mereka sendiri untuk mensintesis DNA menggunakan RNA sebagai templat dipanggil transkripsi terbalik.Proses menggunakan RNA virus reverse transcriptase untuk mensintesis templat cDNA in vitro dipanggil transkripsi terbalik.Elemen utama yang termasuk dalam sistem transkripsi terbalik: templat RNA, transkripase terbalik, primer dan komponen lain.

1. templat RNA

Pengaruh templat RNA pada transkripsi terbalik dicerminkan dalam struktur, ketulenan dan integritinya.Semakin tinggi ketulenan dan integriti RNA yang diekstrak, semakin tinggi kecekapan transkripsi terbalik dan lebih tepat keputusan kuantitatif berikutnya.RNA yang disucikan oleh reagen pengekstrakan RNA yang biasa digunakan selalunya mengandungi sisa-sisa alkohol dan garam guanidine, yang mempunyai kesan perencatan yang kuat pada kebanyakan transkripase terbalik.

2. Transkripase terbalik

Transkripase terbalik mempunyai pengaruh utama dalam keseluruhan sistem transkripsi terbalik.Suhu yang sesuai untuk transkripase terbalik yang digunakan dalam kebanyakan makmal ialah 42°C.Malah, pembukaan struktur RNA peringkat tinggi memerlukan suhu yang lebih tinggi, dan keperluan untuk transkripase terbalik adalah lebih tinggi.

3.Primer

Primer transkripsi terbalik termasuk primer khusus gen, primer rawak dan primer Oligo dT.Kebanyakan lncRNA tidak mengandungi ekor polyA, dan adalah penting untuk memadankan primer rawak dengan Oligo dT dengan betul.

4.Komponen lain

Memandangkan fakta bahawa RNA adalah sangat mudah untuk merosot, pengenalan komponen dalam sistem transkripsi terbalik boleh diminimumkan, yang boleh menghalang kemasukan RNase secara berkesan dan memastikan kemajuan lancar transkripsi terbalik.

Foregenediperoleh daripada templat RNA, transkripsi terbalik kepada qPCR

Iringi pengesanan lncRNA anda secara menyeluruh

Haiwan Jumlah RNA IpengasinganKit (dengan lajur penyingkiran gDNA)

Sel Jumlah RNA IpengasinganKit (dengan lajur penyingkiran gDNA)

Lnc-RT HeroTM I(Dengan gDNase)(Super Premix untuk sintesis cDNA untaian pertama daripada lncRNA)

Masa Nyata PCR EasyTM-SYBR Green I

Akelebihan ofPengekstrakan RNA:

Kit ini menggunakan teknologi pengekstrakan RNA generasi ketiga, tidak perlu menggunakan DNase.

11 minit dari sel kultur plat 96, 24, 12 dan 6 telaga, pengekstrakan kecekapan tinggi RNA sel bebas gDNA, ketulenan tinggi, dan berkualiti tinggi.

Kelebihan transkripsi terbalik lncRNA:

Sistem transkripsi terbalik yang dibangunkan khas untuk LncRNA untuk membuang pencemaran DNA genomik dengan cepat.

Sistem transkripsi songsang mempunyai kestabilan terma yang tinggi dan masih mempunyai prestasi transkripsi songsang yang baik pada 50°C.

Templat dengan kandungan GC tinggi dan struktur sekunder yang kompleks boleh diterbalikkan dengan kecekapan tinggi.

Kelebihanof qPCR:

Permulaan panas Foregene Taq Polymerase mempunyai kecekapan amplifikasi yang lebih tinggi, sensitiviti amplifikasi yang lebih tinggi dan kekhususan amplifikasi yang lebih tinggi

Campuran Mudah PCR Sebenar yang dioptimumkan menjadikan SYBR Green I mempunyai sensitiviti pengesanan yang lebih tinggi, dan keamatan pendarfluornya adalah 3-5 kali ganda daripada produk yang serupa, yang boleh memenuhi keperluan pelbagai jenis eksperimen kuantitatif pendarfluor.