Berapa banyak yang anda tahu

Mengenai Npengekstrakan asid ukleik

Permulaan dan akhir asid nukleik yang telah dimurnikan

Semuanya sukar pada mulanya, asid nukleik tulen adalah yang paling banyak

Permulaan eksperimen molekul, untuk eksperimen seterusnya

Kejayaan atau kegagalan mempunyai kesan yang penting.

Spektrofotometer UV surih/surih ultra digemari oleh ramai penyelidik saintifik kerana ia dapat mengesan kepekatan asid nukleik dan sisa-sisa protein dan ion garam dengan mudah, cepat dan menjimatkan.

Seperti yang kita sedia maklum, A260 bermaksud nilai OD penyerapan asid nukleik, A280 bermaksud nilai OD penyerapan kepekatan protein, A230 bermaksud nilai OD penyerapan kepekatan ion garam, jadi A260 boleh menukar kepekatan asid nukleik, A260/280 bermaksud sisa protein, A260/230 bermaksud residu ion garam yang ditemui, tetapi ini hanya satu kaedah pengukur yang berdasarkan pengkaji, tetapi ini hanya satu kaedah pengukur yang berdasarkan kajian penyelidik.konvensional” untuk mempercayai bahawa ia boleh menjelaskan ketulenan DNA dan RNA kepadatahap tertentu.Ia bukan satu-satunya piawaian untuk mengenal pasti hasil dan ketulenan asid nukleik, ia hanya digunakan sebagai rujukan, dan ia bukan "standard emas".

Manual Thermo Fisher ND-2000 menekankan kebolehpercayaan keputusan ujian

Sebabnya ialah keputusan yang diperoleh dengan menggunakan spektrofotometer UV mikro/ultramikro hanya mencerminkan hasil dan ketulenan asid nukleik dari sisi, dan terdapat banyak faktor yang mempengaruhi (laluan optik, isipadu sampel, kepekatan sampel, nilai pH, ion lain yang mempengaruhi pengukuran penyerapan, dll.), nilai OD yang diukur tidak semestinya tepat.Pada masa yang sama, disebabkan kekurangan kekhususan bahan penentuan nilai penyerapan, DNA untai tunggal, DNA untai dua, RNA, dNTP, dan beberapa protein semuanya mempunyai puncak penyerapan pada panjang gelombang 260nm, dan kepekatan yang ditentukan oleh A260 sahaja tidak semestinya DNA atau RNA sebenar.Kepekatan, dan integriti dan kemerosotannya tidak boleh dinilai.

Jadi bagaimana untuk menilai kualiti asid nukleik kita yang telah dimurnikan?Selain menggunakan spektrofotometer UV mikro/ultramikro untuk pengesanan, kaedah seperti elektroforesis gel agarose juga diperlukan untuk memaparkan secara visual ketulenan dan integriti asid nukleik, dan untuk menunjukkan kepekatan pada tahap tertentu.Dengan cara ini, hasil asid nukleik dan ketulenan yang diperoleh daripada hasil pengesanan pelbagai kaedah adalah boleh dipercayai.

Perbandingan carta eksperimen

DNA genomik sel H1299 telah diekstrak menggunakan kit Pengekstrakan DNA syarikat A, dan pencemaran kekotoran yang ketara telah dilihat, menghasilkan nilai OD yang tinggi

(Nilai pengukuran OD dan elektroferogram yang sepadan)

Indeks penilaian

Adakah terdapat "standard emas" untuk hasil asid nukleik dan ujian kualiti?

Setahu kita, tiada kaedah yang mudah, cepat dan murah.Sama ada spektrofotometer, elektroforesis gel, atau spektrometri jisim, semuanya mencerminkan kepekatan dan ketulenan asid nukleik dalam larutan dari aspek yang berbeza, dan mereka perlu dinilai dengan merujuk antara satu sama lain.

Indeks penilaian terbaik sentiasaaplikasi eksperimen susulan.Ia tidak menjejaskan kecekapan transkripsi terbalik dan amplifikasi PCR.Mendapatkan produk amplifikasi yang boleh dipercayai dan nilai Ct, dan mendapatkan urutan lengkap dengan penjujukan adalah pengekstrakan asid nukleik yang berjaya.

Kesimpulannya, pandangan teori nisbah sahaja harus dicabar oleh pandangan "menggunakan keputusan percubaan hiliran yang baik sebagai parameter pengekstrakan yang baik"!

Kit pengekstrakan RNA DNA Foregene yang disyorkan untuk mendapatkan ketulenan DNA/RNA yang tinggi:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/