Petua untuk Meningkatkan Pemulihan Gam

1. Tingkatkan beban sampel semasa elektroforesis.

2. Gunakan penimbal elektroforesis yang baru disediakan.

3. Apabila memotong gam, cuba potong hanya gam dengan jalur untuk mengurangkan jumlah pemotongan gam: tidak perlu gam dengan sedikit serpihan tujuan, jika tidak, ia akan menjejaskan kadar pemulihan.

4. Selepas mencairkan dua atau lebih kepingan gam, gunakan tiub tidak kira berapa besar isipadunya dan pindahkan ke lajur yang sama.

5. Penyelesaian yang ditambah dalam sol boleh menjadi lebih sedikit, yang lebih kondusif untuk pengikatan DNA ke membran, tetapi secara amnya tidak melebihi 750ul.

6. Kunci kepada pemulihan gel adalah dengan mengikat DNA pada lajur melalui kepekatan garam, keasidan (cas) dan hidrofobisiti larutan dalam lajur.Oleh itu, jika pH penimbal elektroforesis terlalu tinggi, 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) boleh ditambah kepada sol;untuk memintas molekul DNA dengan lebih baik pada membran, 30% isopropanol boleh ditambah untuk memanaskan ke dalam cecair selepas melarutkan gam.

7. Sebelum menambah eluen, biarkan lajur pada suhu bilik selama beberapa minit (kira-kira 10 minit) untuk menyejat sepenuhnya etanol.

8. Akhir sekali, tambah kurang eluen untuk meminimumkan volum pemulihan.Secara amnya, eluen 30-50μl digunakan untuk elusi (tidak terlalu sedikit, jika tidak, ia tidak akan dapat membasahi membran, yang tidak kondusif untuk elusi);titisan elusi berada di tengah-tengah membran, untuk mengelusi sepenuhnya DNA yang terikat pada membran.

9. Selepas menambah eluen, ia boleh dicairkan dalam mandi air 55 darjah selama 5 minit atau diletakkan di dalam tab mandi air 50 darjah selama lebih daripada 10 minit, atau dimeteraikan dengan parafilem pada 4 darjah semalaman, dan kemudian disentrifugasi untuk pemulihan keesokan harinya, kesannya adalah baik.

10. Masukkan eluat yang telah disentrifugasi kembali ke dalam lajur penjerapan dan emparan semula.

Kaedah dan prosedur terperinci untuk pemulihan produk PCR

1. Kitar semula getah biasa

Jika anda ingin memulihkan gam, sebaiknya gunakan kit, yang mudah dan mempunyai kadar pemulihan yang lebih tinggi sedikit.Jika anda benar-benar perlu memulihkannya secara manual, anda boleh menambah 3 kali ganda isipadu TE selepas memotong gam.Selepas cair dalam mandi air, fenol, fenol/kloroform diekstrak dengan bersih, dan etanol dimendakkan.Itu sahaja.

2. Pemulihan DNA daripada gel takat lebur rendah

Pemurnian Serpihan DNA Tambah TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) sama dengan isipadu gel, dan letakkan dalam tab mandi air 65°C selama 5 minit untuk melarutkan gel sepenuhnya.

Selepas ia dibawa ke suhu bilik, jumlah fenol yang sama (tepu dengan TE, TE telah dimeteraikan di lapisan atas, dan lapisan bawah fenol dikeluarkan) ditambah, dan campuran itu dicampur perlahan-lahan (tiada pencampuran diperlukan), dan disentrifugasi pada 12,000 rpm selama 3 minit.Ulang 1-2 kali.

Ambil supernatan, tambahkan 0.1 isipadu 3mol/L natrium asetat (pH 5.2) dan 2.5 kali isipadu etanol mutlak untuk menjalankan pemendakan etanol.Larutkan DNA yang telah disucikan dengan jumlah TE yang sesuai, ukur kandungan, dan sediakan untuk digunakan (ia boleh digunakan untuk analisis struktur gen sasaran, penyediaan probe, dll.).

3. Pemulihan PCR dengan kekhususan amplifikasi yang baik

Jika kekhususan penguatan PCR adalah baik, ia hanyalah penulenan dan pemulihan mudah produk PCR.Anda boleh menambah 50ug/ml proteinase K pada produk PCR, 37 darjah selama 1j, ekstrak sekali dengan fenol/kloroform, ekstrak sekali dengan kloroform, dan tambahkan 0.1 isipadu supernatan.Natrium asetat diperoleh semula melalui pemendakan dengan 2.5 isipadu etanol mutlak.

Produk Berkaitan:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/