Nisbah rendah A260/A230 biasanya disebabkan oleh kekotoran dengan panjang gelombang penyerapan maksimum pada 230nm.Mari lihat apakah kekotoran ini termasuk:

• Bahan pencemar biasa	Panjang gelombang penyerapan	Kesan nisbah
  Protein	~230nm dan 280nm	Pengurangan serentak A260/A 280dan A260/A 280nisbah
  garam guanidine	220-240 nm	Kurangkan A260/A 280nisbah
  Fenol	~270nm	-
  Trizol	~230nm dan 270nm	Kurangkan A260/A 280nisbah
  EDTA	~230nm	Kurangkan A260/A 280nisbah
  Etanol	230-240 nm	Kurangkan A260/A 280nisbah

 
 
 
Panjang gelombang penyerapan dan nilai kontras bahan pencemar biasa

Ppencemaran rotein
Pencemaran protein boleh dianggap sebagai pencemaran yang paling biasa dalam proses pengekstrakan asid nukleik.Protein wujud antara fasa akueus atas dan fasa bawahorganikfasa .Pencemaran akan mengurangkan nisbah A260/A280 dan A260/A230 pada masa yang sama, dan nisbah A260/A230 akan berubah dengan lebih jelas berbanding nisbah A260/A280.
Semasa seterusnyatranskripsi terbalikor tindak balas qPCR, sisa protein boleh menghalang atau mengganggu fungsi enzim.Cara terbaik untuk mengelakkan pencemaran protein adalah dengan mengingati prinsip "bukannya lebih sedikit daripada lebih, jumlah kecil berkali-kali" semasa menyedut supernatan.

2. Pencemaran Guanidinium
hidroklorida (GuHCl) dan guanidine thiocyanate (GTC) mempunyai kesan denaturasi protein, yang boleh memusnahkan membran sel dengan cepat semasa proses pengekstrakan asid nukleik, menyebabkan denaturasi dan pemendakan protein.Panjang gelombang penyerapan GuHCl dan GTC adalah antara 220-240 nm, dansisa garam guanidinium akan mengurangkan nisbah A260/A230.Walaupun garam guanidinium sisa akan mengurangkan nisbah,impak ke atas eksperimen hiliran sebenarnya boleh diabaikan.

3. Pencemaran Trizol
Komponen utama Trizol ialah fenol.Fungsi utama fenol adalah untuk melisiskan sel dan membebaskan protein dan bahan asid nukleik dalam sel.Walaupun fenol boleh menyahtukarkan protein dengan berkesan, ia tidak dapat menghalang aktiviti RNase sepenuhnya.Oleh itu, 8 -hydroxyquinoline , guanidine isothiocyanate , β-mercaptoethanol, dsb. ditambah kepada TRIzol untuk menghalang RNase endogen dan eksogen.
Apabila mengekstrak RNA selular, Trizol boleh melisiskan sel dengan cepat dan menghalang nuklease yang dibebaskan daripada sel, dan baki Trizol akan mengurangkan nisbah A260/A230 dengan ketara.
Kaedah pemprosesan: Semasa mengempar, mesti diperhatikan bahawa fenol dalam Trizol mudah larut dalam fasa air di bawah keadaan 4° dan suhu bilik.

4. Sisa etanol
Etanol digunakan dalam proses terakhir untuk memendakan DNA sambil melarutkan ion garam yang mungkin terikat pada DNA.Panjang gelombang penyerapan yang paling tinggipuncak penyerapanetanol juga berada pada 230-240 nm, yangjuga akan mengurangkan nisbah A260/A230.
Kaedah mengelakkan sisa etanol boleh diulang dua kali semasa elusi akhir, meniup dalamHud wasapselama dua minit untuk membolehkan etanol tersejat sepenuhnya sebelum menambah penimbal untuk elusi.
Walau bagaimanapun, perlu diketahui bahawa nisbah tersebut hanyalah indeks penilaian kualiti RNA.Jika operasi yang dinyatakan di atas dikawal dengan ketat, sisihan antara nisbah dan julat standard tidak akan memberi kesan yang besar pada eksperimen hiliran.
Produk Berkaitan:
Kit Pengasingan RNA Jumlah Haiwan
Kit Pengasingan RNA Jumlah Tumbuhan
Kit Pengasingan RNA Jumlah Sel
Kit Pengasingan RNA Jumlah Tumbuhan Plus