(96-well) Kit RT-qPCR Sel Cepat Cepat – SYBR Green I
Penerangan
The(96-baik) QuickEasyTM Kit RT-qPCR Langsung Sel–SYBR Hijau Imenyediakansistem penimbal lisis yang unikto cepat melepaskan RNAdaripada sel kultursampel untuk tindak balas RT-qPCR, menghapuskan memakan masa dan susah payahProses penulenan RNA, dan hanya mengambil masa 7 minit untuk mendapatkan templat RNA yang diperlukan.The5× Campuran RT Terusdan2× Campuran qPCR terus-SYBRdisediakan dalam kotak boleh dengan cepat danberkesan mendapatkan kuantitatif masa nyatakeputusan PCR.
5× Direct RT Mix dan 2× Direct qPCR Mix-SYBR mempunyai toleransi perencat yang kuat, dan boleh menggunakan lysate sampel untuk diuji sebagai templat untuk transkripsi songsang yang cekap dan amplifikasi khusus.Reagen mengandungi Foregene Reverse Transcriptase yang unik dengan pertalian tinggi untuk RNA , serta Hot D- Taq DNA Polymerase , dNTPs, MgCl2 , penimbal tindak balas, pengoptimum dan penstabil PCR, dan boleh digunakan bersama dengan penimbal lisis untuk mengesan sampel dengan cepat, mudah dan tepat, dan ia mempunyai ciri-ciri kepekaan yang tinggi, kekhususan yang kuat dan kestabilan yang baik.
Kit ini bertujuan untuk lisis sistem mikro sel 96-well culture, dan mempunyai keseragaman dan konsistensi yang baik;komponen kit menyediakan 96 tindak balas lisis, 96 tindak balas transkripsi terbalik dan tindak balas 96 × 2 qPCR, yang boleh memenuhi plat sel 96-telaga untuk kegunaan sekali, mengelakkan pencemaran yang disebabkan oleh pembukaan berulang, pembekuan dan pencairan reagen dan kemerosotan prestasi reagen.
Komponen kit
| Komposisi kit ( 50 μSistem lisis L/20 μLRT sistem tindak balas /20μSistem tindak balas L qPCR) | DRT-03011 | Teguran | |
| 96T | |||
| BahagianI | PenampanCL | 5 mL | selLysis |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| PenampanST | 500 μL | ||
| Bahagian II | DNAPemadam | 100 μL | |
| 5× Campuran RT Terus | 400 μL | RT | |
| 2× Campuran qPCR Terus-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| Pewarna Rujukan 50× ROX | 400µL | ||
| RNase- PercumaddH2 O | 1.7mL |
| |
| Mtahunan | 1 sekeping | 1 hidangan | |
*: Pemadam DNA reagen lisis disertakan dalam Bahagian II kit;Komponen Lisis Sel, RT dan qPCR boleh dibeli secara berasingan.
Ciri&kelebihan
■Mudah dan berkesan : dengan teknologi Cell Direct RT, sampel RNA boleh diperolehi dalam masa 7 minit sahaja.
■ Permintaan sampel adalah kecil, serendah 10 sel boleh diuji.
■ Daya tampung yang tinggi: ia boleh mengesan RNA dengan cepat dalam sel yang dikultur dalam plat 384, 96, 24, 12, 6-telaga.
■ Pemadam DNA boleh membuang genom yang dikeluarkan dengan cepat, mengurangkan kesan ke atas keputusan eksperimen seterusnya.
■ Sistem RT dan qPCR yang dioptimumkan menjadikan transkripsi terbalik RT-PCR dua langkah lebih cekap dan PCR lebih spesifik, dan lebih tahan terhadap perencat tindak balas RT-qPCR.
Aplikasi kit
Skop penggunaan: sel kultur.
- RNA yang dikeluarkan oleh lisis sampel: hanya terpakai pada templat RT-qPCR kit ini.
- Kit boleh digunakan untuk tujuan berikut: analisis ekspresi gen, pengesahan kesan pembungkaman gen pengantara siRNA, pemeriksaan dadah, dsb.
Penyimpanan dan Jangka hayat
Bahagian I kit ini hendaklah disimpan pada 4℃;Bahagian II hendaklah disimpan pada -20℃.
Foregene Protease Plus II hendaklah disimpan pada 4℃, jangan beku pada -20 ℃.
Reagen 2×Direct qPCR Mix-Taqman hendaklah disimpan pada -20℃dalam gelap;jika digunakan dengan kerap, ia juga boleh disimpan di 4℃ untuk simpanan jangka pendek (habis dalam masa 10 hari).
Prinsip reka bentuk primer PCR Masa Nyata
Primer Hadapan dan Primer Songsang
Untuk PCR Masa Nyata, reka bentuk primer adalah sangat penting.Primer berkaitan dengan kekhususan dan kecekapan penguatan PCR, dan boleh direka bentuk dengan merujuk kepada prinsip berikut:
- Panjang primer: 18-30bp.
- Kandungan GC: 40-60%.
- Nilai Tm: Perisian reka bentuk primer, seperti Primer 5, boleh memberikan nilai Tm primer.Nilai Tm primer huluan dan hiliran hendaklah sedekat mungkin.Formula pengiraan Tm juga boleh digunakan: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Apabila melakukan PCR, suhu di bawah nilai Tm primer 5 °C biasanya dipilih sebagai suhu penyepuhlindapan (peningkatan yang sepadan dalam suhu penyepuhlindapan boleh meningkatkan kekhususan tindak balas PCR).
- Primer dan produk PCR:
- Panjang produk penguatan PCR primer reka bentuk adalah sebaik-baiknya 100-150bp.
- Primer reka bentuk di kawasan struktur sekunder templat harus dielakkan sebanyak mungkin.
- Elakkan pembentukan 2 atau lebih asas pelengkap antara hujung 3′ primer hulu dan hilir.
- Pangkalan terminal primer 3′ tidak boleh hadir dengan 3 G atau C tambahan berturut-turut.
- Primer itu sendiri tidak boleh mempunyai struktur pelengkap, jika tidak, struktur jepit rambut akan terbentuk, menjejaskan penguatan PCR.
- ATCG harus diagihkan sekata mungkin dalam urutan primer, dan pangkalan terminal 3′ harus dielakkan sebagai T.
Lampiran1：Cell LangsungRT-qPCR Komponen kitt pek tambahan
1.Penyelesaian Lisis Sel
| Penyelesaian Lisis Sel | |||
| Komponen kit (sistem lisis 24 telaga / telaga) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Bahagiansaya | Penampan CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Penampan ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| BahagianII | Pemadam DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| Campuran RT | |
| Komponen kit (sistem tindak balas 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Campuran RT Terus | 800 μl |
| ddH Tanpa RNase2O | 1.7 ml × 2 |
| Campuran qPCR | ||
| Komponen kit (sistem tindak balas 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| Pewarna Rujukan 20× ROX | 40 μl | 200 μl |
| ddH Tanpa RNase2O | 1.7 ml | 10 ml |
Manual Arahan:
