Kit qPCR RT Direct Sel—SYBR HIJAU I Direct Sel Lysis Sel Sedia Kit qRT-PCR Satu langkah
Penerangan
Kit ini menggunakan sistem penimbal lisis unik yang boleh melepaskan RNA dengan cepat daripada sampel sel berbudaya untuk tindak balas RT-qPCR, dengan itu menghapuskan proses penulenan RNA yang memakan masa dan susah payah.Templat RNA boleh diperolehi dalam masa 7 minit sahaja.Yang 5×Campuran RT Terus dan 2×Reagen qPCR Mix-SYBR terus yang disediakan oleh kit boleh dengan cepat dan berkesan memperoleh keputusan PCR kuantitatif masa nyata.
5×Campuran RT Terus dan 2×Direct qPCR Mix-SYBR mempunyai toleransi perencat yang kuat, dan lisat sampel boleh digunakan sebagai templat untuk RT-qPCR secara langsung.Kit ini mengandungi RNA unik pertalian tinggi Foregene reverse transcriptase, dan Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, penimbal tindak balas, pengoptimum PCR dan penstabil.
Spesifikasi
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Komponen kit
| Bahagian I | Penampan CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Penampan ST | |
| Bahagian II | Pemadam DNA |
| 5× Campuran RT Terus | |
| 2× Campuran qPCR terus-SYBR | |
| Pewarna Rujukan 50× ROX | |
| ddH2O Tanpa RNase | |
| Arahan | |
Ciri&kelebihan
■Mudah dan berkesan : dengan teknologi Cell Direct RT, sampel RNA boleh diperolehi dalam masa 7 minit sahaja.
■ Permintaan sampel adalah kecil, serendah 10 sel boleh diuji.
■ Daya tampung yang tinggi: ia boleh mengesan RNA dengan cepat dalam sel yang dikultur dalam plat 384, 96, 24, 12, 6-telaga.
■ Pemadam DNA boleh membuang genom yang dikeluarkan dengan cepat, mengurangkan kesan ke atas keputusan eksperimen seterusnya.
■ Sistem RT dan qPCR yang dioptimumkan menjadikan transkripsi terbalik RT-PCR dua langkah lebih cekap dan PCR lebih spesifik, dan lebih tahan terhadap perencat tindak balas RT-qPCR.
Aplikasi kit
Skop penggunaan: sel kultur.
- RNA yang dikeluarkan oleh lisis sampel: hanya terpakai pada templat RT-qPCR kit ini.
- Kit boleh digunakan untuk tujuan berikut: analisis ekspresi gen, pengesahan kesan pembungkaman gen pengantara siRNA, pemeriksaan dadah, dsb.
Gambar rajah
Penyimpanan dan Jangka hayat
Bahagian I kit ini hendaklah disimpan pada suhu 4 ℃;Bahagian II hendaklah disimpan pada -20℃.
Foregene Protease Plus II hendaklah disimpan pada 4℃, jangan beku pada -20 ℃.
Reagen 2×Direct qPCR Mix-SYBR hendaklah disimpan pada -20℃dalam gelap;jika digunakan dengan kerap, ia juga boleh disimpan di 4℃ untuk simpanan jangka pendek (habis dalam masa 10 hari).
Prinsip reka bentuk primer PCR Masa Nyata
Primer Hadapan dan Primer Songsang
Untuk PCR Masa Nyata, reka bentuk primer adalah sangat penting.Primer berkaitan dengan kekhususan dan kecekapan penguatan PCR, dan boleh direka bentuk dengan merujuk kepada prinsip berikut:
Panjang primer: 18-30bp.
Kandungan GC: 40-60%.
Nilai Tm: Perisian reka bentuk primer, seperti Primer 5, boleh memberikan nilai Tm primer.Nilai Tm primer huluan dan hiliran hendaklah sedekat mungkin.Formula pengiraan Tm juga boleh digunakan: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Apabila melakukan PCR, suhu di bawah nilai Tm primer 5 °C biasanya dipilih sebagai suhu penyepuhlindapan (peningkatan yang sepadan dalam suhu penyepuhlindapan boleh meningkatkan kekhususan tindak balas PCR).
Primer dan produk PCR:
Panjang produk penguatan PCR primer reka bentuk adalah sebaik-baiknya 100-150bp.
Primer reka bentuk di kawasan struktur sekunder templat harus dielakkan sebanyak mungkin.
Elakkan pembentukan 2 atau lebih asas pelengkap antara hujung 3′ primer hulu dan hilir.
Pangkalan terminal primer 3′ tidak boleh hadir dengan 3 G atau C tambahan berturut-turut.
Primer itu sendiri tidak boleh mempunyai struktur pelengkap, jika tidak, struktur jepit rambut akan terbentuk, menjejaskan penguatan PCR.
ATCG harus diagihkan sekata mungkin dalam urutan primer, dan pangkalan terminal 3′ harus dielakkan sebagai T.
Lampiran 1：Pek tambahan komponen Kit RT-qPCR Langsung Sel
1.Penyelesaian Lisis Sel
|
| |||
| Komponen kit (sistem lisis 24 telaga / telaga) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Bahagiansaya | Penampan CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Penampan ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| BahagianII | Pemadam DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
2. Campuran RT
|
| |
| Komponen kit (sistem tindak balas 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Campuran RT Terus | 800 μl |
| ddH Tanpa RNase2O | 1.7 ml × 2 |
|
| ||
| Komponen kit (sistem tindak balas 20 μl) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Campuran qPCR terus-SYBR | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| Pewarna Rujukan 50× ROX | 40 μl | 200 μl |
| ddH Tanpa RNase2O | 1.7 ml | 10 ml |
Manual Arahan:
