Kit RT-qPCR Langsung II
Penerangan Kit:
◮Kit RT-qPCR terus, menggunakan Foreasy Reverse Transcriptase dan Foreasy HS Taq DNA Polymerase yang dibangunkan oleh Foregene, dengan penimbal tindak balas yang unik, menjadikan kit ini mempunyai rintangan dan keserasian yang kuat, dan ia boleh menguji secara langsung tindak balas menggunakan sistem Foregene Lysis sebagai templat.Kit ini boleh memohon untuk kit pengesanan asid nukleik COVID-19 dan pembangunan kit pengesanan asid nukleik bakteria patogen lain.
Penerangan
Kit RT-qPCR Langsung menyediakan penimbal RT-qPCR dibungkus berasingan, Polimerase DNA Foreasy HS Taq yang cekap tinggidan Foreasy Reverse Transcriptase(MMLV),menjadikannya mudah untuk mencipta kit bahagian belakang dan pelarasan sistem, dalam pengesahan mudah.
Kit RT-qPCR terus, menggunakan Foreasy Reverse Transcriptase dan Foreasy HS Taq DNA Polymerase yang dibangunkan oleh Foregene, dengan penimbal tindak balas yang unik, menjadikan kit ini mempunyai rintangan dan keserasian yang kuat, dan ia boleh menguji secara langsung tindak balas menggunakan sistem Foregene Lysis sebagai templat.Kit ini boleh memohon untuk kit pengesanan asid nukleik COVID-19 dan pembangunan kit pengesanan asid nukleik bakteria patogen lain.
Kit ini secara langsung boleh menjadi komponen produk IVD, menggunakan dengan mudah dan pantas.Ia hanya memerlukan pengesahan mudah, tanpa membangun lagi.
Spesifikasi
500T, 50,000T
Komponen kit
| Kandungan kit (sistem tindak balas 20 μL) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50,000 T | |
| Foreasy Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 mL×5 |
| Foreasy HS Taq DNA Polimerase (5 U/μL) | 100 μL×1 | 1 mL×10 |
| 2× RT-qPCR TerusPenampan | 1 mL ×5 | 500 mL × 1 |
| Arahan | 1 | 1 |
Langkah-langkah Operasi
A: Sediakan templat dan reagen
1. Sediakan templat RNA yang disediakan (Adalah disyorkan untuk menggunakan kit siri Kit Pengasingan RNA Total Foregene untuk mengekstrak dan memurnikan templat RNA) atau sampel produk retak (Adalah disyorkan untuk menggunakan sistem Foregene Lysis), primer khusus(10 μM) dan alat guna guna lain yang berkaitan.
2. Masukkan 2× Direct RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O dan 20× ROX Reference Dye (jika perlu) di dalam kotak dengan ais, menjadikan ini cair secara semula jadi dan dicampur dengan lembut.
B: Sediakan sistem RT-qPCR
Dapatkan separuh daripada isipadu penimbal tindak balas sistem tindak balas (contohnya, jika isipadu sistem ialah 20 μL, ia perlu mendapatkan 10 μL 2× Penampan RT-qPCR Langsung). Untukjumlah enzim yang sepadan, kami mencadangkan ituM-MLV：10-30 U/20 μL sistem tindak balas,Taqpolimerase DNA：Sistem tindak balas 1-2 U/20 μLini adalah cadangan kami, anda harus menguji dan menyesuaikannya), tambah templat RNA, primer dan probe khusus, dan tambah ddH Bebas RNase2O hingga 20 μL.Penyediaan khusus sistem tindak balas RT-qPCR boleh dirujuk kepada jadual 1 berikut.
Jadual 1 : Sediakan sistem RT-qPCR
| Komponen | Kelantangan | Kepekatan akhir |
| 2× Penampan RT-qPCR Terus | 10 μL | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase(MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA Polimerase | 1-2 U | |
| Primer Hadapan(10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| Primer Terbalik(10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| Probe(4 μM) | 1 μL | 200nM |
| Templat(RNA atau Lysate) | X μL | |
| Pewarna Rujukan 20× ROX | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
| Jumlah Isipadu | 20 μL |
Nota: Primer Hadapan dan Primer Songsang ialah primer khusus gen sasaran.Sistem qPCR boleh dilaraskan mengikut model eksperimen dan PCR praktikal.Kami mengesyorkan 400nM untuk kepekatan akhir kebanyakan primer.Laraskan isipadu primer dan kuar tertentu mengikut kepekatan yang disediakan dan kepekatan akhir yang disyorkan, sila.
1*: Pilih kepekatan akhir Pewarna Rujukan ROX yang sesuai mengikut instrumen PCR kuantitatif yang berbeza.Kepekatan Pewarna ROX Rujukan optimum bagi instrumen PCR kuantitatif biasa ditunjukkan dalam jadual berikut:
| Instrumen PCR kuantitatif | Kepekatan akhir Pewarna Rujukan ROX |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Langkah Pertama,dan lain-lain. | 1× (contohnya, tambahkan 1μl 20×ROX Rujukan Pewarna dalam sistem tindak balas 20 μL) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P dan Mx4000, dsb. | 0.5× (contohnya, tambahkan 0.5μl 20×ROX Rujukan Pewarna dalam sistem tindak balas 20 μL) |
| Instrumen PCR Roche, instrumen PCR Bio-Rad, instrumen PCR kuantitatif Eppendorf, dsb. | Tanpa Pewarna Rujukan ROX |
Penyimpanan dan Jangka hayat
Kit hendaklah disimpan pada -20 ± 5℃.Ia hendaklah segera disimpan dalam peti sejuk termostatik -20℃.Tempoh sah laku adalah 2 tahun jika disimpan dalam keadaan yang sesuai.
